PBS

Dlaczego PBS jest tak ważny?

PBS posiada dwie właściwości, dzięki którym jest tak powszechnie używany. Po pierwsze jest izotoniczny, po drugie utrzymuje pH na poziomie 7,4.

1. Izotoniczność: PBS jest roztworem izotonicznym. Oznacza to, że stężenie soli w PBS jest takie, by ciśnienie osmotyczne roztworu było identyczne z tym, które panuje wewnątrz komórek. Dzięki temu, komórki nie ulegają rozpadowi w trakcie doświadczeń. Odpowiednie stężenie soli jest również istotne dla odpowiedniej pracy wielu enzymów, receptorów czy przeciwciał.
2. Odczyn (pH): PBS utrzymuje pH na poziomie około 7,4. Odpowiada to pH, jakie występuje w płynie tkankowym oraz cytoplazmie. Jest więc to wartość, w której zachodzi większość procesów biologicznych i optimum dla wielu enzymów i receptorów.

Z czego składa się PBS?

W skład PBS wchodzą woda oraz sole mineralne występujące w soli fizjologicznej: chlorek sodu oraz chlorek potasu. Wzbogacone zostały o wodorofosforan sodu i diwodorofosforan potasu. Pełnią one funkcję buforową i utrzymują pH 7,4 na stałym poziomie.

Do czego użyć PBS?

PBS ma wiele zastosowań. Dzięki uniwersalnemu składowi oraz dobrym właściwościom buforującym można go użyć w następujących zastosowaniach.

1. Hodowle komórkowe (In Vitro)

To najczęstsze zastosowanie. PBS służy do przemywania komórek w butelkach hodowlanych. Przed podaniem enzymów (takich jak trypsyna) służących do odklejenia komórek od podłoża, należy wypłukać resztki pożywki, która mogłaby hamować działanie enzymu. PBS nadaje się do tego idealnie.

Ważne: Do przemywania komórek stosuje się zazwyczaj PBS bez jonów wapnia  i magnezu, aby zapobiec zbrylaniu się komórek.

2. Techniki immunologiczne (ELISA, Western Blot)

W testach wykrywających białka takich jak ELISA czy Western Blot, PBS pełni rolę rozpuszczalnika dla przeciwciał oraz buforu płuczącego. Pomaga usunąć niezwiązane cząsteczki, nie niszcząc przy tym delikatnych wiązań między antygenem a przeciwciałem. W celu zmniejszenia napięcia powierzchniowego i zwiększenia zdolności penetracyjnych do PBS dodaje się często detergent np. Tween – 20 lub Tween – 80.

3. Mikrobiologia

Służy do przygotowywania seryjnych rozcieńczeń bakterii. Jeśli chcemy policzyć kolonie bakteryjne, musimy rozcieńczyć próbkę. Użycie wody zniszczyłoby bakterie (przez ciśnienie osmotyczne), natomiast PBS pozwala im przetrwać proces liczenia.

4. Transport próbek biologicznych

Ze względu na swoje właściwości konserwujące środowisko fizjologiczne, PBS jest często używany jako medium transportowe dla wymazów czy pobranych tkanek, zanim trafią one do analizy.

5. Mrożenie komórek i bakterii

PBS ze swoim fizjologicznym składem i zdolnością do utrzymywania prawidłowego pH jest idealny do mrożenia komórek i bakterii. W tym celu zazwyczaj dodaje się do roztworu krioprotektanta, który zmniejsza wielkość kryształków wody i zapobiega niszczeniu komórek podczas zamrażania.

Jak przygotować PBS?

PBS zazwyczaj przygotowuje się w postaci 10 x stężonego roztworu i rozcieńcza przed wykorzystaniem.

10 x PBS

Skład (na 1 l):

• 80 g NaCl
• 2 g KCl
• 17,8 Na₂HPO₄
• 2,4 g KH₂PO₄

Odważ składniki i przenieś ilościowo do kolby miarowej o objętości 1 l. Dodaj około 950 ml wody i rozpuść składniki (najlepiej przy użyciu mieszadła magnetycznego). Przy pomocą HCl i NaOH doprowadź pH do wartości 7,4. Dopełnij wodą do kreski i wymieszaj przez obrót.

Tak przygotowany roztwór można przechowywać do czasu doświadczenia.

1x PBS.

100 ml 10x PBS przenieś do kolby miarowej o objętości 1l. Dopełnij wodą do objętości około 950 ml i wymieszaj. Dopełnij wodą do kreski i ponownie wymieszaj przez obrót.

Uwaga! Jeśli przygotowujesz PBS by wykorzystać go w hodowlach komórkowych lub mikrobiologii, pamiętaj o przefiltrowaniu go przez filtr jałowiący.