{"id":2244,"date":"2026-05-14T12:06:02","date_gmt":"2026-05-14T10:06:02","guid":{"rendered":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244"},"modified":"2026-05-14T12:06:04","modified_gmt":"2026-05-14T10:06:04","slug":"western-blot","status":"publish","type":"page","link":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244","title":{"rendered":"Western Blot"},"content":{"rendered":"\n<p>Spo\u015br\u00f3d wszystkich technik immunochemicznych, western blot jest metod\u0105 wyj\u0105tkow\u0105. Jako jedyna wykorzystuje rozdzia\u0142 elektroforetyczny jako punkt startowy do analizy. Pomimo, \u017ce jest czasoch\u0142onna, to znalaz\u0142a zastosowanie w laboratoriach na ca\u0142ym \u015bwiecie.<\/p>\n\n\n\n<figure class=\"wp-block-image size-full\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" width=\"906\" height=\"598\" src=\"https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/05\/image.jpeg\" alt=\"Western blot - ok\u0142adka artyku\u0142u\" class=\"wp-image-2247\" srcset=\"https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/05\/image.jpeg 906w, https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/05\/image-300x198.jpeg 300w, https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/05\/image-768x507.jpeg 768w\" sizes=\"auto, (max-width: 906px) 100vw, 906px\" \/><\/figure>\n\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\">1. Co to jest Western Blot?<\/h2>\n\n\n\n<p><strong>Western blot<\/strong> to wieloetapowa technika analityczna. S\u0142u\u017cy do wykrywania specyficznych bia\u0142ek w materia\u0142ach biologicznych, takich jak lizaty kom\u00f3rkowe, homogenaty tkankowe czy p\u0142yny ustrojowe.<\/p>\n\n\n\n<h3 class=\"wp-block-heading\">Jak dzia\u0142a western blot?<\/h3>\n\n\n\n<p>Analiz\u0119 western blot mo\u017cna podzieli\u0107 na kilka etap\u00f3w:<\/p>\n\n\n\n<ol class=\"wp-block-list\">\n<li><strong>Preparatyka bia\u0142ek:<\/strong> Ten etap mo\u017ce by\u0107 r\u00f3\u017cny w zale\u017cno\u015bci od matrycy, kt\u00f3ra podlega analizie. W przypadku kom\u00f3rek nale\u017cy wykona\u0107 ich liz\u0119 by wyekstrahowa\u0107 bia\u0142ka. Czasem potrzeba wyizolowa\u0107 bia\u0142ka z membran kom\u00f3rkowych przy u\u017cyciu detergent\u00f3w. Niekt\u00f3re matryce mog\u0105 wymaga\u0107 zastosowania r\u00f3\u017cnych technik np. dializy, ultrafiltracji, SPE itp.<\/li>\n\n\n\n<li><strong>Elektroforeza SDS \u2013 Page: <\/strong>Wyizolowane bia\u0142ka rozdzielane s\u0105 <a href=\"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=1662\" type=\"page\" id=\"1662\">elektroforetycznie<\/a>. Ich rozdzia\u0142 oparty jest o mas\u0119 cz\u0105steczkow\u0105. <strong><a href=\"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=1712\" type=\"page\" id=\"1712\">Wi\u0119cej na temat SDS-Page znajdziesz w tym artykule.<\/a><\/strong><\/li>\n\n\n\n<li>T<strong>ransfer na membran\u0119: <\/strong>uwi\u0119zione w porach \u017celu bia\u0142ka s\u0105 trudne do dalszej analizy. \u017bel jest kruch i nieprzepuszczalny dla przeciwcia\u0142. Dlatego konieczne jest przeniesienie (transfer) bia\u0142ek z \u017celu na membran\u0119.<\/li>\n\n\n\n<li><strong>Blokowanie membrany:<\/strong> Podobnie jak w\u00a0 technice <a href=\"https:\/\/bioeducator.eu\/?cat=181\" type=\"category\" id=\"181\">ELISA<\/a>, membran\u0119 nale\u017cy zablokowa\u0107. Uniemo\u017cliwi to niespecyficzne wi\u0105zanie si\u0119 przeciwcia\u0142 z sam\u0105 membran\u0105. Do blokowanie najcz\u0119\u015bciej u\u017cywa si\u0119 BSA, lub bia\u0142ek mleka.<\/li>\n\n\n\n<li><strong>Immunodetekcja:<\/strong> W celu detekcji bia\u0142ek wykorzystuje si\u0119 znakowane przeciwcia\u0142a. Te \u0142\u0105cz\u0105 si\u0119 swoi\u015bcie z wykrywanym bia\u0142kiem. Nadmiar przeciwcia\u0142 nale\u017cy wyp\u0142uka\u0107. W zale\u017cno\u015bci od wybranego sposobu detekcji, bia\u0142ka widoczne s\u0105 w postaci barwnych lub \u015bwiec\u0105cych pr\u0105\u017ck\u00f3w.<\/li>\n<\/ol>\n\n\n<div class=\"wp-block-image\">\n<figure class=\"aligncenter size-full\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" width=\"592\" height=\"252\" src=\"https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/05\/image.png\" alt=\"Etapy techniki western blot\" class=\"wp-image-2246\" srcset=\"https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/05\/image.png 592w, https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/05\/image-300x128.png 300w\" sizes=\"auto, (max-width: 592px) 100vw, 592px\" \/><\/figure>\n<\/div>\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\">Sk\u0105d si\u0119 wzi\u0119\u0142a nazwa Western Blot?<\/h2>\n\n\n\n<p>Historia nazewnictwa metod typu <em>blotting<\/em> jest jednym z najciekawszych historii biologii molekularnej, pokazuj\u0105c\u0105<\/p>\n\n\n\n<p>Wszystko zacz\u0119\u0142o si\u0119 w 1975 roku, kiedy <strong>Edwin Southern<\/strong> opisa\u0142 metod\u0119 transferu fragment\u00f3w DNA na membran\u0119. Technika ta, od nazwiska tw\u00f3rcy, zosta\u0142a nazwana <strong>Southern blot<\/strong>.<\/p>\n\n\n\n<p>Dwa lata p\u00f3\u017aniej opracowano analogiczn\u0105 metod\u0119 dla kwasu RNA, naukowcy, bawi\u0105c si\u0119 analogi\u0105 do kierunk\u00f3w \u015bwiata, nazwali j\u0105 <strong>Northern blot<\/strong>.<\/p>\n\n\n\n<p>W 1979 roku Harry Towbin i wsp\u00f3\u0142pracownicy opisali metod\u0119 transferu bia\u0142ek, ale to <strong>W. Neal Burnette<\/strong> w 1981 roku wprowadzi\u0142 termin &#8222;Western blot&#8221;. Burnette, pracuj\u0105cy w\u00f3wczas w Fred Hutchinson Cancer Research Center, chcia\u0142 kontynuowa\u0107 tradycj\u0119 zapocz\u0105tkowan\u0105 przez Southerna i &#8222;p\u00f3\u0142nocn\u0105&#8221; odmian\u0119 dla RNA. Cho\u0107 redaktorzy czasopism naukowych pocz\u0105tkowo odrzucali t\u0119 nazw\u0119 jako zbyt kolokwialn\u0105, \u015brodowisko naukowe przyj\u0119\u0142o j\u0105 z entuzjazmem<\/p>\n\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\">Rodzaje transferu bia\u0142ek<\/h2>\n\n\n\n<p>Transfer, czyli proces przenoszenia bia\u0142ek z \u017celu na membran\u0119, jest krytycznym momentem, kt\u00f3ry determinuje czu\u0142o\u015b\u0107 i powtarzalno\u015b\u0107 ca\u0142ego eksperymentu. Bia\u0142ka musz\u0105 zachowa\u0107 sw\u00f3j uk\u0142ad (tzw. map\u0119 elektroforetyczn\u0105) wypracowany w \u017celu.<\/p>\n\n\n\n<h3 class=\"wp-block-heading\">Transfer mokry (Wet Transfer)<\/h3>\n\n\n\n<p>Jest to najbardziej klasyczna i wydajna metoda. \u017bel i membrana s\u0105 \u015bci\u015bni\u0119te w specjalnej &#8222;kanapce&#8221; i ca\u0142kowicie zanurzone w zbiorniku z buforem transferowym.<\/p>\n\n\n\n<ul class=\"wp-block-list\">\n<li><strong>Zalety:<\/strong> Najwy\u017csza wydajno\u015b\u0107 transferu dla bia\u0142ek o du\u017cych masach cz\u0105steczkowych (>150 kDa). Mo\u017cliwo\u015b\u0107 ch\u0142odzenia systemu pozwala na prowadzenie d\u0142ugich transfer\u00f3w przy wysokich napi\u0119ciach.<\/li>\n\n\n\n<li><strong>Wady:<\/strong> Wymaga du\u017cej ilo\u015bci buforu i czasu (cz\u0119sto ca\u0142onocne procedury).<\/li>\n<\/ul>\n\n\n\n<h3 class=\"wp-block-heading\">Transfer p\u00f3\u0142suchy (Semi-dry Transfer)<\/h3>\n\n\n\n<p>W tym uk\u0142adzie &#8222;kanapka&#8221; jest umieszczana bezpo\u015brednio mi\u0119dzy dwiema p\u0142askimi elektrodami p\u0142ytowymi. Jedynym \u017ar\u00f3d\u0142em elektrolitu jest bufor, kt\u00f3rym nas\u0105czone s\u0105 bibu\u0142y filtracyjne otaczaj\u0105ce \u017cel i membran\u0119.<\/p>\n\n\n\n<ul class=\"wp-block-list\">\n<li><strong>Zalety:<\/strong> Szybko\u015b\u0107 (15\u201360 minut) i oszcz\u0119dno\u015b\u0107 odczynnik\u00f3w.<\/li>\n\n\n\n<li><strong>Wady:<\/strong> Mniejsza wydajno\u015b\u0107 w przypadku bardzo du\u017cych bia\u0142ek; ryzyko przegrzania \u017celu przy pr\u00f3bie wyd\u0142u\u017cenia czasu transferu.<\/li>\n<\/ul>\n\n\n\n<h3 class=\"wp-block-heading\">Transfer suchy (Dry Transfer)<\/h3>\n\n\n\n<p>Nowoczesne systemy zautomatyzowane wykorzystuj\u0105 specjalne \u017cele i membrany z wbudowanymi matrycami elektrolitowymi.<\/p>\n\n\n\n<ul class=\"wp-block-list\">\n<li><strong>Zalety:<\/strong> Ekstremalnie szybki (nawet poni\u017cej 10 minut), brak konieczno\u015bci przygotowywania bufor\u00f3w.<\/li>\n\n\n\n<li><strong>Wady:<\/strong> Wysoki koszt materia\u0142\u00f3w eksploatacyjnych dedykowanych konkretnemu producentowi.<\/li>\n<\/ul>\n\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\">Rodzaje membran: PVDF vs Nitroceluloza<\/h2>\n\n\n\n<p>Immunodetekcja zachodzi na specjalnej membranie. Jej w\u0142a\u015bciwo\u015bci pomagaj\u0105 unieruchamia\u0107 bia\u0142ka. Unieruchomione bia\u0142ka mog\u0105 zosta\u0107 wykryte przez przeciwcia\u0142a. W Western blot stosuje si\u0119 dwa rodzaje membran:<\/p>\n\n\n\n<ul class=\"wp-block-list\">\n<li><strong>Nitroceluloza:<\/strong> Klasyczny wyb\u00f3r, charakteryzuje si\u0119 dobr\u0105 wi\u0105zalno\u015bci\u0105 bia\u0142ek i niskim t\u0142em. Jest jednak krucha i nie poleca si\u0119 jej do procedur wymagaj\u0105cych wielokrotnego usuwania i ponownego nak\u0142adania przeciwcia\u0142 (stripping).<\/li>\n\n\n\n<li><strong>PVDF (Polifluorek winylidenu):<\/strong> Wykazuje znacznie wi\u0119ksz\u0105 wytrzyma\u0142o\u015b\u0107 mechaniczn\u0105 i wy\u017csz\u0105 pojemno\u015b\u0107 wi\u0105zania bia\u0142ek (hydrofobowych). Wymaga jednak wst\u0119pnej aktywacji w metanolu.<\/li>\n<\/ul>\n\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\">Metody detekcji<\/h2>\n\n\n\n<p><\/p>\n\n\n\n<div class=\"wp-block-columns is-layout-flex wp-container-core-columns-is-layout-9d6595d7 wp-block-columns-is-layout-flex\">\n<div class=\"wp-block-column is-layout-flow wp-block-column-is-layout-flow\">\n<p>W metodzie Western blot stosuje si\u0119 dwa rodzaje przeciwcia\u0142:<\/p>\n\n\n\n<ul class=\"wp-block-list\">\n<li>Pierwszorz\u0119dowe \u2013 przeciwcia\u0142a, kt\u00f3re rozpoznaj\u0105 antygen bia\u0142ka, kt\u00f3re podlega analizie. Najcz\u0119\u015bciej s\u0105 to przeciwcia\u0142a kr\u00f3licze lub mysie. Mog\u0105 one rozpoznawa\u0107 bia\u0142ko lub jego specyficzn\u0105 form\u0119 np. ufosforylowan\u0105.<\/li>\n\n\n\n<li>Drugorz\u0119dowe \u2013 s\u0105 to znakowane przeciwcia\u0142a, specyficznie rozpoznaj\u0105ce fragment fc przeciwcia\u0142 pierwszorz\u0119dowych.<\/li>\n<\/ul>\n\n\n\n<p>Przeciwcia\u0142a drugorz\u0119dowe mog\u0105 mie\u0107 znaczniki r\u00f3\u017cnego rodzaju. W zale\u017cno\u015bci od wyposa\u017cenia laboratorium mo\u017cna wybra\u0107 r\u00f3\u017cne metody detekcji.<\/p>\n<\/div>\n\n\n\n<div class=\"wp-block-column is-layout-flow wp-block-column-is-layout-flow\">\n<figure class=\"wp-block-image size-full\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" width=\"585\" height=\"407\" src=\"https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/05\/image.jpg\" alt=\"mechanizm detekcji w western blot\" class=\"wp-image-2245\" srcset=\"https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/05\/image.jpg 585w, https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/05\/image-300x209.jpg 300w\" sizes=\"auto, (max-width: 585px) 100vw, 585px\" \/><\/figure>\n<\/div>\n<\/div>\n\n\n\n<h3 class=\"wp-block-heading\">Detekcja chromogenna (HRP)<\/h3>\n\n\n\n<p>Ta metoda wykorzystuje enzym HRP&nbsp; (peroskydaza chrzanowa) sprz\u0119\u017cony z przeciwcia\u0142em drugorz\u0119dowym. Po dodaniu substratu np. TMBV (3,3&#8242;,5,5&#8242;-tetrametylobenzydyn\u0119) uzyskuje si\u0119 barwny pr\u0105\u017cek na membranie.<\/p>\n\n\n\n<p>Inne stosowane substraty chromogenne to:<\/p>\n\n\n\n<p>DAB&nbsp; &#8211; 3,3\u2019diaminobenzydyna \u2013 ciemnobr\u0105zowy kolor<\/p>\n\n\n\n<p>4 \u2013 CN \u2013 purporowo niebieski kolor<\/p>\n\n\n\n<p>AEC (3-amino-9-etylokarbazol) \u2013 czerwony osad<\/p>\n\n\n\n<h3 class=\"wp-block-heading\">Detekcja chemiluminescencyjna (HRP)<\/h3>\n\n\n\n<p>Najcz\u0119\u015bciej stosowana metoda wykorzystuj\u0105ca enzym <strong>HRP (peroksydaza chrzanowa)<\/strong> sprz\u0119\u017cony z przeciwcia\u0142em drugorz\u0119dowym. Po dodaniu substratu (luminolu), enzym katalizuje reakcj\u0119 utleniania, kt\u00f3rej efektem jest emisja \u015bwiat\u0142a.<\/p>\n\n\n\n<ul class=\"wp-block-list\">\n<li><strong>Cechy:<\/strong> Niezwykle wysoka czu\u0142o\u015b\u0107 (poziom femtogram\u00f3w). Sygna\u0142 jest rejestrowany na b\u0142onach rentgenowskich lub w systemach cyfrowych z kamer\u0105 CCD. Jest to jednak metoda kinetyczna \u2013 sygna\u0142 zanika wraz z wyczerpaniem substratu.<\/li>\n<\/ul>\n\n\n\n<h3 class=\"wp-block-heading\">Detekcja fluorescencyjna<\/h3>\n\n\n\n<p>Tutaj przeciwcia\u0142a drugorz\u0119dowe s\u0105 znakowane <strong>fluoroforami<\/strong> (np. barwniki IRDye, Alexa Fluor).<\/p>\n\n\n\n<ul class=\"wp-block-list\">\n<li><strong>Zalety:<\/strong> Pozwala na <strong>multipleksowanie<\/strong>, czyli jednoczesne wykrywanie kilku bia\u0142ek o r\u00f3\u017cnych masach na tej samej membranie przy u\u017cyciu r\u00f3\u017cnych d\u0142ugo\u015bci fali. Sygna\u0142 jest stabilny i liniowy w bardzo szerokim zakresie, co czyni t\u0119 metod\u0119 idealn\u0105 do precyzyjnej analizy ilo\u015bciowej.<\/li>\n<\/ul>\n\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\">Limitacje metody<\/h2>\n\n\n\n<p>Western blot posiada ograniczenia, o kt\u00f3rych ka\u017cdy badacz musi pami\u0119ta\u0107:<\/p>\n\n\n\n<ol start=\"1\" class=\"wp-block-list\">\n<li><strong>Swoisto\u015b\u0107 przeciwcia\u0142:<\/strong> Wynik jest tak wiarygodny, jak specyficzne jest u\u017cyte przeciwcia\u0142o. Przeciwcia\u0142a o niskiej jako\u015bci mog\u0105 dawa\u0107 sygna\u0142y niespecyficzne (dodatkowe pr\u0105\u017cki) lub wysokie t\u0142o.<\/li>\n\n\n\n<li><strong>Charakter p\u00f3\u0142ilo\u015bciowy:<\/strong> Western blot rzadko podaje bezwzgl\u0119dn\u0105 liczb\u0119 cz\u0105steczek. Zazwyczaj okre\u015blamy zmiany wzgl\u0119dne (np. &#8222;ekspresja wzros\u0142a dwukrotnie&#8221;), co wymaga stosowania kontroli \u0142adowania (loading controls, np. aktyna, GAPDH).<\/li>\n\n\n\n<li><strong>W\u0105ski zakres dynamiczny (w ECL):<\/strong> Przy detekcji chemiluminescencyjnej \u0142atwo o nasycenie sygna\u0142u, co uniemo\u017cliwia rzeteln\u0105 ocen\u0119 ilo\u015bciow\u0105 pr\u00f3bek o bardzo wysokim st\u0119\u017ceniu bia\u0142ka.<\/li>\n\n\n\n<li><strong>Artefakty transferu:<\/strong> B\u0105belki powietrza mi\u0119dzy \u017celem a membran\u0105 powoduj\u0105 &#8222;dziury&#8221; w obrazie pr\u0105\u017ck\u00f3w.<\/li>\n\n\n\n<li><strong>Preparatyka bia\u0142ek:<\/strong> W trakcie przygotowania pr\u00f3bki do analizy mo\u017ce doj\u015b\u0107 do fragmentacji bia\u0142ek lub powstania agregat\u00f3w. Mo\u017ce\u00a0 to doprowadzi\u0107 do obecno\u015bci kilku pr\u0105\u017ck\u00f3w i fa\u0142szowania wynik\u00f3w. Warto stosowa\u0107 inhibitory proteaz i surfaktanty, zapobiegaj\u0105ce agregacji.<\/li>\n<\/ol>\n\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\">Modyfikacje Western Blot<\/h2>\n\n\n\n<p>Nauka ewoluuje, a wraz z ni\u0105 Western blot. Oto niekt\u00f3re modyfikacje:<\/p>\n\n\n\n<ul class=\"wp-block-list\">\n<li><strong>Far-Western Blot:<\/strong> S\u0142u\u017cy do badania oddzia\u0142ywa\u0144 bia\u0142ko-bia\u0142ko. Zamiast przeciwcia\u0142a pierwszorz\u0119dowego, u\u017cywa si\u0119 innego bia\u0142ka, kt\u00f3re ma potencjalnie wi\u0105za\u0107 si\u0119 z antygenem na membranie.<\/li>\n\n\n\n<li><strong>Southwestern Blot:<\/strong> Pozwala bada\u0107 interakcje bia\u0142ko-DNA. Na membran\u0119 z rozdzielonymi bia\u0142kami nanosi si\u0119 znakowane sondy DNA.<\/li>\n\n\n\n<li><strong>Native Western Blot:<\/strong> Pomija etap denaturacji SDS. Pozwala to na badanie bia\u0142ek w ich naturalnej formie, zachowuj\u0105c struktur\u0119 czwartorz\u0119dow\u0105 i kompleksy bia\u0142kowe.<\/li>\n\n\n\n<li><strong>Automatyczny Western Blot (Capillary WB):<\/strong> Nowoczesne systemy (np. Jess, Wes) wykonuj\u0105 ca\u0142y proces w mikrokapilarach, co eliminuje b\u0142\u0119dy manualne i pozwala na analiz\u0119 24 pr\u00f3bek w 3 godziny.<\/li>\n\n\n\n<li><strong>Dot Blot:<\/strong> Pr\u00f3bk\u0119 bia\u0142ek nanosi si\u0119 bezpo\u015brednio na membran\u0119, pomijaj\u0105c etap elektroforezy. Nadaje si\u0119 jako metoda przesiewowa do szybkiej detekcji bia\u0142ek, bez oznacze\u0144 ilo\u015bciowych.<\/li>\n<\/ul>\n\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\">Zastosowanie Western Blot<\/h2>\n\n\n\n<ol start=\"1\" class=\"wp-block-list\">\n<li><strong>Diagnostyka chor\u00f3b zaka\u017anych:<\/strong> Przez lata by\u0142 to &#8222;z\u0142oty standard&#8221; potwierdzania zaka\u017cenia <strong>HIV i boreliozy<\/strong> (wykrywanie przeciwcia\u0142 przeciw specyficznym bia\u0142kom wirusa).<\/li>\n\n\n\n<li><strong>Badania onkologiczne:<\/strong> Monitorowanie poziomu onkoprotein oraz stanu fosforylacji bia\u0142ek sygna\u0142owych w odpowiedzi na nowatorskie terapie.<\/li>\n\n\n\n<li><strong>Neurologia:<\/strong> Wykrywanie nieprawid\u0142owych form bia\u0142ek, takich jak amyloid-beta w badaniach nad chorob\u0105 Alzheimera czy prion\u00f3w.<\/li>\n\n\n\n<li><strong>Kontrola jako\u015bci lek\u00f3w:<\/strong> Weryfikacja czysto\u015bci bia\u0142ek rekombinowanych i przeciwcia\u0142 monoklonalnych stosowanych w medycynie.<\/li>\n\n\n\n<li><strong>Badanie ekspresji gen\u00f3w:<\/strong> Western blot jest powszechnie stosowany w badaniu ekspresji gen\u00f3w na poziomie bia\u0142ka. Ten cel wykorzystywany jest cz\u0119sto w badaniach klinicznych, monitoruj\u0105c poziom wybranych biomarker\u00f3w.<\/li>\n\n\n\n<li><strong>Analiza sygna\u0142\u00f3w kom\u00f3rkowych:<\/strong> Przeciwcia\u0142a pierwszorz\u0119dowe mog\u0105 rozpoznawa\u0107 konkretne sekwencje bia\u0142ka a nawet ich r\u00f3\u017cn\u0105 form\u0119 np. ufosforylowan\u0105. Dzi\u0119ki temu mo\u017cna bada\u0107 aktywacj\u0119 receptor\u00f3w i przenoszenie sygna\u0142\u00f3w wewn\u0105trzkom\u00f3rkowych (np. wzrost poziomu fosforylacji receptora pod wp\u0142ywem bod\u017aca)<\/li>\n<\/ol>\n\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\">Podsumowanie<\/h2>\n\n\n\n<p>Min\u0119\u0142o ju\u017c prawie p\u00f3\u0142 wieku od opracowanie techniki Western Blot. Mimo up\u0142ywu lat, do dzi\u015b znajduje zastosowanie w laboratoriach biologicznych na ca\u0142ym \u015bwiecie. Pami\u0119taj o dobrej jako\u015bci odczynnik\u00f3w, doborze odpowiedniej techniki detekcji i dobrym przygotowaniu pr\u00f3bki. Od tego zale\u017cy jako\u015b\u0107 uzyskanych wynik\u00f3w.<\/p>\n\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\">Bibliografia i \u017ar\u00f3d\u0142a<\/h2>\n\n\n\n<ul class=\"wp-block-list\">\n<li><a href=\"https:\/\/pubmed.ncbi.nlm.nih.gov\/6266278\/\"><strong>Burnette, W. N. (1981).<\/strong> &#8222;Western blotting&#8221;: electrophoretic transfer of proteins from sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gels to unmodified nitrocellulose and radiographic detection with antibody and radioiodinated protein A. <em>Analytical Biochemistry<\/em>, 112(2), 195-203.<\/a><\/li>\n\n\n\n<li><a href=\"https:\/\/pubmed.ncbi.nlm.nih.gov\/23050259\/\"><strong>Mahmood, T., &amp; Yang, P. C. (2012).<\/strong> Western blot: technique, theory, and trouble shooting. <em>North American Journal of Medical Sciences<\/em>, 4(9), 429-434.<\/a><\/li>\n\n\n\n<li><a href=\"https:\/\/pubmed.ncbi.nlm.nih.gov\/388439\/\"><strong>Towbin, H., Staehelin, T., &amp; Gordon, J. (1979).<\/strong> Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. <em>Proceedings of the National Academy of Sciences<\/em>, 76(9), 4350-4354.<\/a><\/li>\n<\/ul>\n\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\">Q&amp;A<\/h2>\n\n\n\n<div class=\"schema-faq wp-block-yoast-faq-block\"><div class=\"schema-faq-section\" id=\"faq-question-1778752490944\"><strong class=\"schema-faq-question\"><strong>Q1: Dlaczego musz\u0119 aktywowa\u0107 membran\u0119 PVDF w metanolu przed transferem?<\/strong><\/strong> <p class=\"schema-faq-answer\">Membrana PVDF jest silnie hydrofobowa (odpycha wod\u0119). Metanol &#8222;nawil\u017ca&#8221; pory membrany, umo\u017cliwiaj\u0105c buforowi transferowemu penetracj\u0119 struktury, co jest niezb\u0119dne do zaj\u015bcia kontaktu mi\u0119dzy bia\u0142kami a membran\u0105.<\/p> <\/div> <div class=\"schema-faq-section\" id=\"faq-question-1778752499309\"><strong class=\"schema-faq-question\"><strong>Q2: Czym r\u00f3\u017cni si\u0119 blokowanie w mleku od blokowania w BSA?<\/strong><\/strong> <p class=\"schema-faq-answer\">Odt\u0142uszczone mleko jest ta\u0144sze i bardzo skuteczne, ale zawiera bia\u0142ka (np. kazein\u0119), kt\u00f3re mog\u0105 wchodzi\u0107 w interakcje z przeciwcia\u0142ami przeciwko bia\u0142kom fosforylowanym. W badaniach fosfo-bia\u0142ek zaleca si\u0119 stosowanie BSA (albumina surowicy wo\u0142owej).<\/p> <\/div> <div class=\"schema-faq-section\" id=\"faq-question-1778752517558\"><strong class=\"schema-faq-question\"><strong>Q3: Moje pr\u0105\u017cki s\u0105 &#8222;u\u015bmiechni\u0119te&#8221; (zakrzywione). Co zrobi\u0142em \u017ale?<\/strong><\/strong> <p class=\"schema-faq-answer\">To typowy efekt przegrzania \u017celu podczas elektroforezy. Zbyt wysokie napi\u0119cie generuje ciep\u0142o, kt\u00f3re deformuje czo\u0142o rozdzia\u0142u. Nale\u017cy zmniejszy\u0107 napi\u0119cie lub prowadzi\u0107 proces w niskiej temperaturze.<\/p> <\/div> <div class=\"schema-faq-section\" id=\"faq-question-1778752533739\"><strong class=\"schema-faq-question\"><strong>Q4: Co to jest &#8222;stripping&#8221; membrany?<\/strong><\/strong> <p class=\"schema-faq-answer\">To proces usuwania przeciwcia\u0142 z membrany po zako\u0144czeniu detekcji, bez niszczenia samych bia\u0142ek zwi\u0105zanych z membran\u0105. Pozwala to na ponowne u\u017cycie tej samej membrany do wykrycia innego bia\u0142ka (np. kontroli \u0142adowania).<\/p> <\/div> <div class=\"schema-faq-section\" id=\"faq-question-1778752541088\"><strong class=\"schema-faq-question\"><strong>Q5: Dlaczego masa bia\u0142ka na \u017celu nie zgadza si\u0119 z mas\u0105 teoretyczn\u0105?<\/strong><\/strong> <p class=\"schema-faq-answer\">Bia\u0142ka mog\u0105 posiada\u0107 modyfikacje potranslacyjne (np. glikozylacj\u0119), kt\u00f3re zwi\u0119kszaj\u0105 ich mas\u0119. Ponadto, silnie zasadowe lub kwa\u015bne bia\u0142ka mog\u0105 wi\u0105za\u0107 SDS w niestandardowy spos\u00f3b, co zmienia ich mobilno\u015b\u0107 elektroforetyczn\u0105.<\/p> <\/div> <\/div>\n\n\n\n<script async src=\"https:\/\/pagead2.googlesyndication.com\/pagead\/js\/adsbygoogle.js?client=ca-pub-2318520657460692\"\n     crossorigin=\"anonymous\"><\/script>\n\n\n\n<p><\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Spo\u015br\u00f3d wszystkich technik immunochemicznych, western blot jest metod\u0105 wyj\u0105tkow\u0105. Jako jedyna wykorzystuje rozdzia\u0142 elektroforetyczny jako punkt startowy do analizy. Pomimo, \u017ce jest czasoch\u0142onna, to znalaz\u0142a&hellip;<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":2247,"parent":107,"menu_order":-3,"comment_status":"closed","ping_status":"closed","template":"","meta":{"_sitemap_exclude":false,"_sitemap_priority":"","_sitemap_frequency":"","footnotes":""},"class_list":["post-2244","page","type-page","status-publish","has-post-thumbnail","hentry"],"yoast_head":"<!-- This site is optimized with the Yoast SEO plugin v27.6 - https:\/\/yoast.com\/product\/yoast-seo-wordpress\/ -->\n<title>Western Blot - Bioeducator.eu<\/title>\n<meta name=\"description\" content=\"Szczeg\u00f3\u0142owe om\u00f3wienie techniki Western Blot. Mechanizm dzia\u0142ania, etapy, limitacje, modyfikacje, zastosowanie.\" \/>\n<meta name=\"robots\" content=\"index, follow, max-snippet:-1, max-image-preview:large, max-video-preview:-1\" \/>\n<link rel=\"canonical\" href=\"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244\" \/>\n<meta property=\"og:locale\" content=\"pl_PL\" \/>\n<meta property=\"og:type\" content=\"article\" \/>\n<meta property=\"og:title\" content=\"Western Blot - Bioeducator.eu\" \/>\n<meta property=\"og:description\" content=\"Szczeg\u00f3\u0142owe om\u00f3wienie techniki Western Blot. Mechanizm dzia\u0142ania, etapy, limitacje, modyfikacje, zastosowanie.\" \/>\n<meta property=\"og:url\" content=\"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244\" \/>\n<meta property=\"og:site_name\" content=\"Bioeducator.eu\" \/>\n<meta property=\"article:modified_time\" content=\"2026-05-14T10:06:04+00:00\" \/>\n<meta property=\"og:image\" content=\"https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/05\/image.jpeg\" \/>\n\t<meta property=\"og:image:width\" content=\"906\" \/>\n\t<meta property=\"og:image:height\" content=\"598\" \/>\n\t<meta property=\"og:image:type\" content=\"image\/jpeg\" \/>\n<meta name=\"twitter:card\" content=\"summary_large_image\" \/>\n<meta name=\"twitter:label1\" content=\"Szacowany czas czytania\" \/>\n\t<meta name=\"twitter:data1\" content=\"11 minut\" \/>\n<script type=\"application\/ld+json\" class=\"yoast-schema-graph\">{\"@context\":\"https:\\\/\\\/schema.org\",\"@graph\":[{\"@type\":\"ScholarlyArticle\",\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=2244#article\",\"isPartOf\":{\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=2244\"},\"author\":{\"name\":\"radoslaw.obuchowicz\",\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/#\\\/schema\\\/person\\\/fdd8b0df5f6951b44d42ab42ade1beec\"},\"headline\":\"Western Blot\",\"datePublished\":\"2026-05-14T10:06:02+00:00\",\"dateModified\":\"2026-05-14T10:06:04+00:00\",\"mainEntityOfPage\":{\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=2244\"},\"wordCount\":1873,\"publisher\":{\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/#organization\"},\"image\":{\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=2244#primaryimage\"},\"thumbnailUrl\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/wp-content\\\/uploads\\\/2026\\\/05\\\/image.jpeg\",\"inLanguage\":\"pl-PL\"},{\"@type\":[\"WebPage\",\"FAQPage\"],\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=2244\",\"url\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=2244\",\"name\":\"Western Blot - Bioeducator.eu\",\"isPartOf\":{\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/#website\"},\"primaryImageOfPage\":{\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=2244#primaryimage\"},\"image\":{\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=2244#primaryimage\"},\"thumbnailUrl\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/wp-content\\\/uploads\\\/2026\\\/05\\\/image.jpeg\",\"datePublished\":\"2026-05-14T10:06:02+00:00\",\"dateModified\":\"2026-05-14T10:06:04+00:00\",\"description\":\"Szczeg\u00f3\u0142owe om\u00f3wienie techniki Western Blot. Mechanizm dzia\u0142ania, etapy, limitacje, modyfikacje, zastosowanie.\",\"breadcrumb\":{\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=2244#breadcrumb\"},\"mainEntity\":[{\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=2244#faq-question-1778752490944\"},{\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=2244#faq-question-1778752499309\"},{\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=2244#faq-question-1778752517558\"},{\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=2244#faq-question-1778752533739\"},{\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=2244#faq-question-1778752541088\"}],\"inLanguage\":\"pl-PL\",\"potentialAction\":[{\"@type\":\"ReadAction\",\"target\":[\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=2244\"]}]},{\"@type\":\"ImageObject\",\"inLanguage\":\"pl-PL\",\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=2244#primaryimage\",\"url\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/wp-content\\\/uploads\\\/2026\\\/05\\\/image.jpeg\",\"contentUrl\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/wp-content\\\/uploads\\\/2026\\\/05\\\/image.jpeg\",\"width\":906,\"height\":598},{\"@type\":\"BreadcrumbList\",\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=2244#breadcrumb\",\"itemListElement\":[{\"@type\":\"ListItem\",\"position\":1,\"name\":\"Strona g\u0142\u00f3wna\",\"item\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/\"},{\"@type\":\"ListItem\",\"position\":2,\"name\":\"Bioeducator\",\"item\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/\"},{\"@type\":\"ListItem\",\"position\":3,\"name\":\"Baza wiedzy\",\"item\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=107\"},{\"@type\":\"ListItem\",\"position\":4,\"name\":\"Western Blot\"}]},{\"@type\":\"WebSite\",\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/#website\",\"url\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/\",\"name\":\"Bioeducator.eu\",\"description\":\"\",\"publisher\":{\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/#organization\"},\"potentialAction\":[{\"@type\":\"SearchAction\",\"target\":{\"@type\":\"EntryPoint\",\"urlTemplate\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?s={search_term_string}\"},\"query-input\":{\"@type\":\"PropertyValueSpecification\",\"valueRequired\":true,\"valueName\":\"search_term_string\"}}],\"inLanguage\":\"pl-PL\"},{\"@type\":\"Organization\",\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/#organization\",\"name\":\"Bioeducator.eu\",\"url\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/\",\"logo\":{\"@type\":\"ImageObject\",\"inLanguage\":\"pl-PL\",\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/#\\\/schema\\\/logo\\\/image\\\/\",\"url\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/wp-content\\\/uploads\\\/2025\\\/03\\\/Bioeducator_logo_poziom.png\",\"contentUrl\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/wp-content\\\/uploads\\\/2025\\\/03\\\/Bioeducator_logo_poziom.png\",\"width\":3910,\"height\":935,\"caption\":\"Bioeducator.eu\"},\"image\":{\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/#\\\/schema\\\/logo\\\/image\\\/\"}},{\"@type\":\"Person\",\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/#\\\/schema\\\/person\\\/fdd8b0df5f6951b44d42ab42ade1beec\",\"name\":\"radoslaw.obuchowicz\",\"image\":{\"@type\":\"ImageObject\",\"inLanguage\":\"pl-PL\",\"@id\":\"https:\\\/\\\/secure.gravatar.com\\\/avatar\\\/fcbdc1450632bf52b5257736b7b7ea5b6781f6b5ebf9cd50c06b709c3b220846?s=96&d=mm&r=g\",\"url\":\"https:\\\/\\\/secure.gravatar.com\\\/avatar\\\/fcbdc1450632bf52b5257736b7b7ea5b6781f6b5ebf9cd50c06b709c3b220846?s=96&d=mm&r=g\",\"contentUrl\":\"https:\\\/\\\/secure.gravatar.com\\\/avatar\\\/fcbdc1450632bf52b5257736b7b7ea5b6781f6b5ebf9cd50c06b709c3b220846?s=96&d=mm&r=g\",\"caption\":\"radoslaw.obuchowicz\"},\"sameAs\":[\"http:\\\/\\\/bioeducator.eu\"],\"url\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?author=1\"},{\"@type\":\"Question\",\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=2244#faq-question-1778752490944\",\"position\":1,\"url\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=2244#faq-question-1778752490944\",\"name\":\"Q1: Dlaczego musz\u0119 aktywowa\u0107 membran\u0119 PVDF w metanolu przed transferem?\",\"answerCount\":1,\"acceptedAnswer\":{\"@type\":\"Answer\",\"text\":\"Membrana PVDF jest silnie hydrofobowa (odpycha wod\u0119). Metanol \\\"nawil\u017ca\\\" pory membrany, umo\u017cliwiaj\u0105c buforowi transferowemu penetracj\u0119 struktury, co jest niezb\u0119dne do zaj\u015bcia kontaktu mi\u0119dzy bia\u0142kami a membran\u0105.\",\"inLanguage\":\"pl-PL\"},\"inLanguage\":\"pl-PL\"},{\"@type\":\"Question\",\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=2244#faq-question-1778752499309\",\"position\":2,\"url\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=2244#faq-question-1778752499309\",\"name\":\"Q2: Czym r\u00f3\u017cni si\u0119 blokowanie w mleku od blokowania w BSA?\",\"answerCount\":1,\"acceptedAnswer\":{\"@type\":\"Answer\",\"text\":\"Odt\u0142uszczone mleko jest ta\u0144sze i bardzo skuteczne, ale zawiera bia\u0142ka (np. kazein\u0119), kt\u00f3re mog\u0105 wchodzi\u0107 w interakcje z przeciwcia\u0142ami przeciwko bia\u0142kom fosforylowanym. W badaniach fosfo-bia\u0142ek zaleca si\u0119 stosowanie BSA (albumina surowicy wo\u0142owej).\",\"inLanguage\":\"pl-PL\"},\"inLanguage\":\"pl-PL\"},{\"@type\":\"Question\",\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=2244#faq-question-1778752517558\",\"position\":3,\"url\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=2244#faq-question-1778752517558\",\"name\":\"Q3: Moje pr\u0105\u017cki s\u0105 \\\"u\u015bmiechni\u0119te\\\" (zakrzywione). Co zrobi\u0142em \u017ale?\",\"answerCount\":1,\"acceptedAnswer\":{\"@type\":\"Answer\",\"text\":\"To typowy efekt przegrzania \u017celu podczas elektroforezy. Zbyt wysokie napi\u0119cie generuje ciep\u0142o, kt\u00f3re deformuje czo\u0142o rozdzia\u0142u. Nale\u017cy zmniejszy\u0107 napi\u0119cie lub prowadzi\u0107 proces w niskiej temperaturze.\",\"inLanguage\":\"pl-PL\"},\"inLanguage\":\"pl-PL\"},{\"@type\":\"Question\",\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=2244#faq-question-1778752533739\",\"position\":4,\"url\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=2244#faq-question-1778752533739\",\"name\":\"Q4: Co to jest \\\"stripping\\\" membrany?\",\"answerCount\":1,\"acceptedAnswer\":{\"@type\":\"Answer\",\"text\":\"To proces usuwania przeciwcia\u0142 z membrany po zako\u0144czeniu detekcji, bez niszczenia samych bia\u0142ek zwi\u0105zanych z membran\u0105. Pozwala to na ponowne u\u017cycie tej samej membrany do wykrycia innego bia\u0142ka (np. kontroli \u0142adowania).\",\"inLanguage\":\"pl-PL\"},\"inLanguage\":\"pl-PL\"},{\"@type\":\"Question\",\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=2244#faq-question-1778752541088\",\"position\":5,\"url\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=2244#faq-question-1778752541088\",\"name\":\"Q5: Dlaczego masa bia\u0142ka na \u017celu nie zgadza si\u0119 z mas\u0105 teoretyczn\u0105?\",\"answerCount\":1,\"acceptedAnswer\":{\"@type\":\"Answer\",\"text\":\"Bia\u0142ka mog\u0105 posiada\u0107 modyfikacje potranslacyjne (np. glikozylacj\u0119), kt\u00f3re zwi\u0119kszaj\u0105 ich mas\u0119. Ponadto, silnie zasadowe lub kwa\u015bne bia\u0142ka mog\u0105 wi\u0105za\u0107 SDS w niestandardowy spos\u00f3b, co zmienia ich mobilno\u015b\u0107 elektroforetyczn\u0105.\",\"inLanguage\":\"pl-PL\"},\"inLanguage\":\"pl-PL\"}]}<\/script>\n<!-- \/ Yoast SEO plugin. -->","yoast_head_json":{"title":"Western Blot - Bioeducator.eu","description":"Szczeg\u00f3\u0142owe om\u00f3wienie techniki Western Blot. Mechanizm dzia\u0142ania, etapy, limitacje, modyfikacje, zastosowanie.","robots":{"index":"index","follow":"follow","max-snippet":"max-snippet:-1","max-image-preview":"max-image-preview:large","max-video-preview":"max-video-preview:-1"},"canonical":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244","og_locale":"pl_PL","og_type":"article","og_title":"Western Blot - Bioeducator.eu","og_description":"Szczeg\u00f3\u0142owe om\u00f3wienie techniki Western Blot. Mechanizm dzia\u0142ania, etapy, limitacje, modyfikacje, zastosowanie.","og_url":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244","og_site_name":"Bioeducator.eu","article_modified_time":"2026-05-14T10:06:04+00:00","og_image":[{"width":906,"height":598,"url":"https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/05\/image.jpeg","type":"image\/jpeg"}],"twitter_card":"summary_large_image","twitter_misc":{"Szacowany czas czytania":"11 minut"},"schema":{"@context":"https:\/\/schema.org","@graph":[{"@type":"ScholarlyArticle","@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244#article","isPartOf":{"@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244"},"author":{"name":"radoslaw.obuchowicz","@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/#\/schema\/person\/fdd8b0df5f6951b44d42ab42ade1beec"},"headline":"Western Blot","datePublished":"2026-05-14T10:06:02+00:00","dateModified":"2026-05-14T10:06:04+00:00","mainEntityOfPage":{"@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244"},"wordCount":1873,"publisher":{"@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/#organization"},"image":{"@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244#primaryimage"},"thumbnailUrl":"https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/05\/image.jpeg","inLanguage":"pl-PL"},{"@type":["WebPage","FAQPage"],"@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244","url":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244","name":"Western Blot - Bioeducator.eu","isPartOf":{"@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/#website"},"primaryImageOfPage":{"@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244#primaryimage"},"image":{"@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244#primaryimage"},"thumbnailUrl":"https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/05\/image.jpeg","datePublished":"2026-05-14T10:06:02+00:00","dateModified":"2026-05-14T10:06:04+00:00","description":"Szczeg\u00f3\u0142owe om\u00f3wienie techniki Western Blot. Mechanizm dzia\u0142ania, etapy, limitacje, modyfikacje, zastosowanie.","breadcrumb":{"@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244#breadcrumb"},"mainEntity":[{"@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244#faq-question-1778752490944"},{"@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244#faq-question-1778752499309"},{"@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244#faq-question-1778752517558"},{"@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244#faq-question-1778752533739"},{"@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244#faq-question-1778752541088"}],"inLanguage":"pl-PL","potentialAction":[{"@type":"ReadAction","target":["https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244"]}]},{"@type":"ImageObject","inLanguage":"pl-PL","@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244#primaryimage","url":"https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/05\/image.jpeg","contentUrl":"https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/05\/image.jpeg","width":906,"height":598},{"@type":"BreadcrumbList","@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244#breadcrumb","itemListElement":[{"@type":"ListItem","position":1,"name":"Strona g\u0142\u00f3wna","item":"https:\/\/bioeducator.eu\/"},{"@type":"ListItem","position":2,"name":"Bioeducator","item":"https:\/\/bioeducator.eu\/"},{"@type":"ListItem","position":3,"name":"Baza wiedzy","item":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=107"},{"@type":"ListItem","position":4,"name":"Western Blot"}]},{"@type":"WebSite","@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/#website","url":"https:\/\/bioeducator.eu\/","name":"Bioeducator.eu","description":"","publisher":{"@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/#organization"},"potentialAction":[{"@type":"SearchAction","target":{"@type":"EntryPoint","urlTemplate":"https:\/\/bioeducator.eu\/?s={search_term_string}"},"query-input":{"@type":"PropertyValueSpecification","valueRequired":true,"valueName":"search_term_string"}}],"inLanguage":"pl-PL"},{"@type":"Organization","@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/#organization","name":"Bioeducator.eu","url":"https:\/\/bioeducator.eu\/","logo":{"@type":"ImageObject","inLanguage":"pl-PL","@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/#\/schema\/logo\/image\/","url":"https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2025\/03\/Bioeducator_logo_poziom.png","contentUrl":"https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2025\/03\/Bioeducator_logo_poziom.png","width":3910,"height":935,"caption":"Bioeducator.eu"},"image":{"@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/#\/schema\/logo\/image\/"}},{"@type":"Person","@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/#\/schema\/person\/fdd8b0df5f6951b44d42ab42ade1beec","name":"radoslaw.obuchowicz","image":{"@type":"ImageObject","inLanguage":"pl-PL","@id":"https:\/\/secure.gravatar.com\/avatar\/fcbdc1450632bf52b5257736b7b7ea5b6781f6b5ebf9cd50c06b709c3b220846?s=96&d=mm&r=g","url":"https:\/\/secure.gravatar.com\/avatar\/fcbdc1450632bf52b5257736b7b7ea5b6781f6b5ebf9cd50c06b709c3b220846?s=96&d=mm&r=g","contentUrl":"https:\/\/secure.gravatar.com\/avatar\/fcbdc1450632bf52b5257736b7b7ea5b6781f6b5ebf9cd50c06b709c3b220846?s=96&d=mm&r=g","caption":"radoslaw.obuchowicz"},"sameAs":["http:\/\/bioeducator.eu"],"url":"https:\/\/bioeducator.eu\/?author=1"},{"@type":"Question","@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244#faq-question-1778752490944","position":1,"url":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244#faq-question-1778752490944","name":"Q1: Dlaczego musz\u0119 aktywowa\u0107 membran\u0119 PVDF w metanolu przed transferem?","answerCount":1,"acceptedAnswer":{"@type":"Answer","text":"Membrana PVDF jest silnie hydrofobowa (odpycha wod\u0119). Metanol \"nawil\u017ca\" pory membrany, umo\u017cliwiaj\u0105c buforowi transferowemu penetracj\u0119 struktury, co jest niezb\u0119dne do zaj\u015bcia kontaktu mi\u0119dzy bia\u0142kami a membran\u0105.","inLanguage":"pl-PL"},"inLanguage":"pl-PL"},{"@type":"Question","@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244#faq-question-1778752499309","position":2,"url":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244#faq-question-1778752499309","name":"Q2: Czym r\u00f3\u017cni si\u0119 blokowanie w mleku od blokowania w BSA?","answerCount":1,"acceptedAnswer":{"@type":"Answer","text":"Odt\u0142uszczone mleko jest ta\u0144sze i bardzo skuteczne, ale zawiera bia\u0142ka (np. kazein\u0119), kt\u00f3re mog\u0105 wchodzi\u0107 w interakcje z przeciwcia\u0142ami przeciwko bia\u0142kom fosforylowanym. W badaniach fosfo-bia\u0142ek zaleca si\u0119 stosowanie BSA (albumina surowicy wo\u0142owej).","inLanguage":"pl-PL"},"inLanguage":"pl-PL"},{"@type":"Question","@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244#faq-question-1778752517558","position":3,"url":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244#faq-question-1778752517558","name":"Q3: Moje pr\u0105\u017cki s\u0105 \"u\u015bmiechni\u0119te\" (zakrzywione). Co zrobi\u0142em \u017ale?","answerCount":1,"acceptedAnswer":{"@type":"Answer","text":"To typowy efekt przegrzania \u017celu podczas elektroforezy. Zbyt wysokie napi\u0119cie generuje ciep\u0142o, kt\u00f3re deformuje czo\u0142o rozdzia\u0142u. Nale\u017cy zmniejszy\u0107 napi\u0119cie lub prowadzi\u0107 proces w niskiej temperaturze.","inLanguage":"pl-PL"},"inLanguage":"pl-PL"},{"@type":"Question","@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244#faq-question-1778752533739","position":4,"url":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244#faq-question-1778752533739","name":"Q4: Co to jest \"stripping\" membrany?","answerCount":1,"acceptedAnswer":{"@type":"Answer","text":"To proces usuwania przeciwcia\u0142 z membrany po zako\u0144czeniu detekcji, bez niszczenia samych bia\u0142ek zwi\u0105zanych z membran\u0105. Pozwala to na ponowne u\u017cycie tej samej membrany do wykrycia innego bia\u0142ka (np. kontroli \u0142adowania).","inLanguage":"pl-PL"},"inLanguage":"pl-PL"},{"@type":"Question","@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244#faq-question-1778752541088","position":5,"url":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=2244#faq-question-1778752541088","name":"Q5: Dlaczego masa bia\u0142ka na \u017celu nie zgadza si\u0119 z mas\u0105 teoretyczn\u0105?","answerCount":1,"acceptedAnswer":{"@type":"Answer","text":"Bia\u0142ka mog\u0105 posiada\u0107 modyfikacje potranslacyjne (np. glikozylacj\u0119), kt\u00f3re zwi\u0119kszaj\u0105 ich mas\u0119. Ponadto, silnie zasadowe lub kwa\u015bne bia\u0142ka mog\u0105 wi\u0105za\u0107 SDS w niestandardowy spos\u00f3b, co zmienia ich mobilno\u015b\u0107 elektroforetyczn\u0105.","inLanguage":"pl-PL"},"inLanguage":"pl-PL"}]}},"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/bioeducator.eu\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/pages\/2244","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/bioeducator.eu\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/pages"}],"about":[{"href":"https:\/\/bioeducator.eu\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/types\/page"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/bioeducator.eu\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/bioeducator.eu\/index.php?rest_route=%2Fwp%2Fv2%2Fcomments&post=2244"}],"version-history":[{"count":5,"href":"https:\/\/bioeducator.eu\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/pages\/2244\/revisions"}],"predecessor-version":[{"id":2252,"href":"https:\/\/bioeducator.eu\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/pages\/2244\/revisions\/2252"}],"up":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/bioeducator.eu\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/pages\/107"}],"wp:featuredmedia":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/bioeducator.eu\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/media\/2247"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/bioeducator.eu\/index.php?rest_route=%2Fwp%2Fv2%2Fmedia&parent=2244"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}