{"id":1980,"date":"2026-02-09T09:00:00","date_gmt":"2026-02-09T08:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=1980"},"modified":"2026-02-09T08:47:56","modified_gmt":"2026-02-09T07:47:56","slug":"chromatografia-wykluczenia-mas","status":"publish","type":"page","link":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=1980","title":{"rendered":"Chromatografia wykluczenia mas"},"content":{"rendered":"\n<div class=\"wp-block-columns is-layout-flex wp-container-core-columns-is-layout-8f761849 wp-block-columns-is-layout-flex\">\n<div class=\"wp-block-column is-layout-flow wp-block-column-is-layout-flow\">\n<p class=\"wp-block-paragraph\">W \u015bwiecie nowoczesnej chemii analitycznej, gdzie dominuj\u0105 oddzia\u0142ywania powinowactwa, wymiana jonowa czy odwr\u00f3cone fazy, chromatografia wykluczenia mas (ang. <em>Size Exclusion Chromatography<\/em> \u2013 SEC) zajmuje miejsce szczeg\u00f3lne. Jest to jedyna technika, w kt\u00f3rej sukces separacji zale\u017cy nie od chemicznej walki o miejsce wi\u0105\u017c\u0105ce, lecz od <strong>fizycznej interakcji cz\u0105steczki z architektur\u0105 przestrzenn\u0105 por\u00f3w z\u0142o\u017ca<\/strong>.<\/p>\n<\/div>\n\n\n\n<div class=\"wp-block-column is-layout-flow wp-block-column-is-layout-flow\">\n<figure class=\"wp-block-image size-large\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" width=\"1024\" height=\"683\" src=\"https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/02\/chromatogtafia-SEC_okladka-1024x683.png\" alt=\"Chromatografia wykluczenia mas - ok\u0142adka\" class=\"wp-image-1990\" srcset=\"https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/02\/chromatogtafia-SEC_okladka-1024x683.png 1024w, https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/02\/chromatogtafia-SEC_okladka-300x200.png 300w, https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/02\/chromatogtafia-SEC_okladka-768x512.png 768w, https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/02\/chromatogtafia-SEC_okladka-391x260.png 391w, https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/02\/chromatogtafia-SEC_okladka.png 1536w\" sizes=\"auto, (max-width: 1024px) 100vw, 1024px\" \/><\/figure>\n<\/div>\n<\/div>\n\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\">Definicja i terminologia: SEC, GPC, czy GFC?<\/h2>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">Chromatografia wykluczenia mas to technika separacyjna, w kt\u00f3rej cz\u0105steczki w roztworze s\u0105 rozdzielane wed\u0142ug ich <strong>obj\u0119to\u015bci hydrodynamicznej<\/strong> (cz\u0119sto skorelowanej z mas\u0105 cz\u0105steczkow\u0105). W zale\u017cno\u015bci od rodzaju fazy ruchomej i charakteru pr\u00f3bki, stosuje si\u0119 zamienne nazewnictwo:<\/p>\n\n\n\n<ul class=\"wp-block-list\">\n<li><strong>GPC (Gel Permeation Chromatography):<\/strong> Termin stosowany, gdy faza ruchoma jest rozpuszczalnikiem organicznym (np. THF, DMF), najcz\u0119\u015bciej w analizie polimer\u00f3w syntetycznych.<\/li>\n\n\n\n<li><strong>GFC (Gel Filtration Chromatography):<\/strong> Termin u\u017cywany w przypadku faz wodnych, typowy dla rozdzia\u0142u biopolimer\u00f3w (bia\u0142ek, kwas\u00f3w nukleinowych).<\/li>\n\n\n\n<li><strong>SEC (Sized Exclusion Chromatography):<\/strong> Termin uniwersalny, obejmuj\u0105cy obie powy\u017csze podkategorie.<\/li>\n<\/ul>\n\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\">Mechanizm rozdzia\u0142u w chromatografii wykluczenia mas (SEC)<\/h2>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">W przeciwie\u0144stwie do wi\u0119kszo\u015bci <a href=\"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=1539\" type=\"page\" id=\"1539\">technik chromatograficznych<\/a>, w SEC <strong>najwi\u0119ksze cz\u0105steczki eluuj\u0105 jako pierwsze<\/strong>. Mechanizm ten opiera si\u0119 na r\u00f3\u017cnicowaniu dost\u0119pnej obj\u0119to\u015bci por\u00f3w dla cz\u0105steczek o r\u00f3\u017cnych rozmiarach.<\/p>\n\n\n\n<h3 class=\"wp-block-heading\">Teoria dyfuzji do por\u00f3w<\/h3>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">Z\u0142o\u017ce w kolumnie SEC sk\u0142ada si\u0119 z porowatych sferycznych cz\u0105stek o \u015bci\u015ble zdefiniowanej \u015brednicy por\u00f3w.<\/p>\n\n\n\n<ol start=\"1\" class=\"wp-block-list\">\n<li><strong>Cz\u0105steczki powy\u017cej limitu wykluczenia:<\/strong> S\u0105 zbyt du\u017ce, by wnikn\u0105\u0107 w pory. Przemieszczaj\u0105 si\u0119 jedynie w przestrzeni mi\u0119dzy cz\u0105stkami z\u0142o\u017ca i opuszczaj\u0105 kolumn\u0119 najszybciej.<\/li>\n\n\n\n<li><strong>Cz\u0105steczki \u015bredniej wielko\u015bci:<\/strong> Mog\u0105 wnika\u0107 do cz\u0119\u015bci por\u00f3w. Ich droga jest wyd\u0142u\u017cona, co op\u00f3\u017ania ich elucj\u0119.<\/li>\n\n\n\n<li><strong>Ma\u0142e cz\u0105steczki:<\/strong> Maj\u0105 dost\u0119p do niemal ca\u0142ej obj\u0119to\u015bci por\u00f3w (obj\u0119to\u015b\u0107 ca\u0142kowitego przenikania). Eluuj\u0105 na samym ko\u0144cu.<\/li>\n<\/ol>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">Podstawowe r\u00f3wnanie opisuj\u0105ce retencj\u0119 w SEC to:<\/p>\n\n\n\n<div class=\"wp-block-math\"><math display=\"block\"><semantics><mrow><msub><mi>V<\/mi><mi>e<\/mi><\/msub><mo>=<\/mo><msub><mi>V<\/mi><mn>0<\/mn><\/msub><mo>+<\/mo><msub><mi>K<\/mi><mrow><mi>s<\/mi><mi>e<\/mi><mi>c<\/mi><\/mrow><\/msub><mo>\u22c5<\/mo><msub><mi>V<\/mi><mi>p<\/mi><\/msub><\/mrow><annotation encoding=\"application\/x-tex\">V_e = V_0 + K_{sec} \\cdot V_p<\/annotation><\/semantics><\/math><\/div>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">Gdzie:<\/p>\n\n\n\n<ul class=\"wp-block-list\">\n<li>V<sub>e<\/sub> \u2013 obj\u0119to\u015b\u0107 retencji (elucji),<\/li>\n\n\n\n<li>V<sub>0<\/sub> \u2013 obj\u0119to\u015b\u0107 martwa (wolna przestrze\u0144 mi\u0119dzy ziarnami z\u0142o\u017ca),<\/li>\n\n\n\n<li>V<sub>p<\/sub> \u2013 obj\u0119to\u015b\u0107 por\u00f3w wewn\u0105trz z\u0142o\u017ca,<\/li>\n\n\n\n<li>K<sub>sec<\/sub> \u2013 wsp\u00f3\u0142czynnik dystrybucji (dla idealnego rozdzia\u0142u przyjmuje warto\u015bci od 0 do 1).<\/li>\n<\/ul>\n\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\">Jak rozwin\u0105\u0107 metod\u0119 SEC?<\/h2>\n\n\n\n<h3 class=\"wp-block-heading\">Rozmiar por\u00f3w<\/h3>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">Rozw\u00f3j metody SEC nale\u017cy zacz\u0105\u0107 od wyboru kolumny. Jest on krytyczny. Obecnie tradycyjne z\u0142o\u017ca na bazie mi\u0119kkich \u017celi dekstranowych (np. Sephadex) ust\u0105pi\u0142y miejsca nowoczesnym materia\u0142om sztywnym, kt\u00f3re pozwalaj\u0105 na prac\u0119 pod wysokim ci\u015bnieniem (UPLC\/UHPLC).<\/p>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">Jednym z najwa\u017cniejszych warto\u015bci na jakie nale\u017cy zwr\u00f3ci\u0107 uwag\u0119 jest wielko\u015b\u0107 por\u00f3w w kolumnie. Wyra\u017cona jest on w Angstremach (A). Od tej wielko\u015bci zale\u017cy to, jak du\u017ce cz\u0105steczki b\u0119d\u0105 wnika\u0107 do wn\u0119trza por\u00f3w. W skr\u00f3cie od wielko\u015bci por\u00f3w zale\u017cy zakres mas, na kt\u00f3rych mo\u017ce dzia\u0142a\u0107 kolumna.<\/p>\n\n\n\n<figure class=\"wp-block-table\"><table class=\"has-fixed-layout\"><tbody><tr><td><strong>Wielko\u015b\u0107 por\u00f3w [\u00c5]<\/strong><\/td><td><strong>Zakres pracy (MW) [kDa]<\/strong><\/td><td><strong>Typowe zastosowania \/ Anality<\/strong><\/td><\/tr><tr><td><strong>40 \u2013 60<\/strong><\/td><td>0.1 \u2013 10<\/td><td>Ma\u0142e peptydy, oligonukleotydy, farmaceutyki niskocz\u0105steczkowe.<\/td><\/tr><tr><td><strong>125<\/strong><\/td><td>1 \u2013 80<\/td><td>Ma\u0142e bia\u0142ka globularne, peptydy o z\u0142o\u017conej strukturze.<\/td><\/tr><tr><td><strong>200<\/strong><\/td><td>5 \u2013 300<\/td><td>Wi\u0119kszo\u015b\u0107 bia\u0142ek osocza, enzymy, fragmenty przeciwcia\u0142 (Fab, scFv).<\/td><\/tr><tr><td><strong>300<\/strong><\/td><td>10 \u2013 1000<\/td><td><strong>Standard dla przeciwcia\u0142 monoklonalnych (mAbs)<\/strong>, dimery i oligomery bia\u0142ek.<\/td><\/tr><tr><td><strong>450 \u2013 500<\/strong><\/td><td>20 \u2013 2000<\/td><td>Du\u017ce kompleksy bia\u0142kowe, agregaty wysokocz\u0105steczkowe, szczepionki.<\/td><\/tr><tr><td><strong>1000+<\/strong><\/td><td>100 \u2013 10 000<\/td><td>Wirusy, cz\u0105stki wirusopodobne (VLP), du\u017ce polimery syntetyczne.<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n<h3 class=\"wp-block-heading\">Rodzaje z\u0142o\u017ca w chromatografii wykluczenia mas (SEC)<\/h3>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">Obecnie wyb\u00f3r kolumn do chromatografii wykluczenia mas (SEC) jest oromny. Do dyspozycji s\u0105 kolumny dekstranowe (Sephadex), krzemionkowe (Silica gel), polimerowe (PS\/DVB). Oto, kt\u00f3re wybra\u0107 do odpowiedniego zastosowania.<\/p>\n\n\n\n<h4 class=\"wp-block-heading\">Z\u0142o\u017ca dekstranowe<\/h4>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">Z\u0142o\u017ca dekstranowe (Sephadex, Sepharose) to naturalne w\u0119glowodany. Tworz\u0105 miekk\u0105 siatk\u0119 dzia\u0142aj\u0105c\u0105 jak sito molekularne. Maj\u0105 nisk\u0105 odporno\u015b\u0107 mecaniczn\u0105 wi\u0119c nie mo\u017cna ich stosowa\u0107 z wysokim ci\u015bnieniem (<a href=\"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=1936\" type=\"page\" id=\"1936\">HPLC<\/a>, UHPLC). Doskonale sprawdzaj\u0105 si\u0119 w chromatografii preparatywnej bia\u0142ek (np. w FPLC)<\/p>\n\n\n\n<h5 class=\"wp-block-heading\">Grupy Diolowe<\/h5>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">Krzemionka (silica gel) jest cz\u0119sto poddawana modyfikacjom chemicznym. Cz\u0119sto modyfikuje si\u0119 krzemionk\u0119 cz\u0105steczkami zawieraj\u0105cymi grupy kwasowe na s\u0105siednich atomach w\u0119gla (tzw. Diol bond phase). Maj\u0105 one podw\u00f3jne dzia\u0142anie. Po pierwsze tworz\u0105 p\u0142aszcz wodny, przy powierzchni krzemionki co utrudnia wchodzenie cz\u0105steczkom w interakcje z faz\u0105 stacjonarn\u0105. Po drugie maskuj\u0105 grupy Si-OH, kt\u00f3re mog\u0142yby wchodzi\u0107 w interakcje jonowe z dodatnio na\u0142adowanymi aminokwasami. Wype\u0142nienia te \u015bwietnie sprawdz\u0105 si\u0119 w separacji bia\u0142ek.<\/p>\n\n\n\n<h5 class=\"wp-block-heading\">Polistyren \u2013 diwynolbenzen (PS\/DVB)<\/h5>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">Ta faza ma najwi\u0119ksze zastosowanie w rozdziale polimer\u00f3w. Nie jest to modyfikacja krzemionki lecz polimer zastosowany jako faza stacjonarna. Zalet\u0105 tego rozwi\u0105zania jest du\u017ca odporno\u015b\u0107. Faza PS\/DVB znajdzie zastosowanie rozdzielaniu polistyren\u00f3w, polietylenu, polipropylenu. Rozdzia\u0142 zachodzi w mobilnej fazie organicznej takiej jak THF czy toluen.<\/p>\n\n\n\n<h5 class=\"wp-block-heading\">Grupy hydroksylowe na matrycach polimetakrylowych<\/h5>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">Te z\u0142o\u017ca stosuje si\u0119 do rozdzia\u0142\u00f3w, w kt\u00f3rych zachodzi podejrzenie, \u017ce anality mog\u0142yby si\u0119 nieodwracalnie zwi\u0105za\u0107 z krzemionk\u0105, lub wymagane jest bardzo wysokie pH (krzemionka rozpuszcza si\u0119 w pH powy\u017cej 9). Polimery metakryolowe s\u0105 odporne na wysokie pH (12 \u2013 13). Dzi\u0119ki obecno\u015bci grup hydroksylowych -OH doskonale si\u0119 sprawdzaj\u0105 do rzodzia\u0142u naturalnych polimer\u00f3w rozpuszczalnych w wodzie np. skrobi czy celulozy.<\/p>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\"><strong>Technologia Hybrydowa np. BEH<\/strong><\/p>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">Prze\u0142omem w SEC by\u0142o wprowadzenie cz\u0105stek hybrydowych. Zamiast czystej krzemionki, kt\u00f3ra jest podatna na degradacj\u0119 chemiczn\u0105 i posiada aktywne grupy kwasowe, zastosowano mostki etylenowe \u0142\u0105cz\u0105ce atomy krzemu. Kolumny hybrydowe maj\u0105 w\u0142a\u015bciwo\u015bci charakterystyczne zar\u00f3wno dla krzemionki jak i polimer\u00f3w.<\/p>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\"><strong>Zalety BEH w SEC:<\/strong><\/p>\n\n\n\n<ul class=\"wp-block-list\">\n<li><strong>Stabilno\u015b\u0107 mechaniczna:<\/strong> Mo\u017cliwo\u015b\u0107 stosowania bardzo ma\u0142ych ziaren (1, 7 \u03bcm), co drastycznie skraca czas analizy i zwi\u0119ksza rozdzielczo\u015b\u0107.<\/li>\n\n\n\n<li><strong>Minimalne oddzia\u0142ywania wt\u00f3rne:<\/strong> Cz\u0105stki BEH s\u0105 bardziej oboj\u0119tne chemicznie ni\u017c tradycyjna krzemionka.<\/li>\n\n\n\n<li><strong>Trwa\u0142o\u015b\u0107:<\/strong> Wysoka odporno\u015b\u0107 na pH i ci\u015bnienie.<\/li>\n<\/ul>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">Kolumny BEH \u015bwietnie sprawdzaj\u0105 si\u0119 w analizie agregat\u00f3w bia\u0142ek.<\/p>\n\n\n\n<h5 class=\"wp-block-heading\">Wyb\u00f3r z\u0142o\u017ca \u2013 podsumowanie<\/h5>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">Wyb\u00f3r z\u0142o\u017ca jest w szczeg\u00f3lno\u015bci podyktowany rodzajem analit\u00f3w, kt\u00f3re chcemy rozdzieli\u0107. Poni\u017csza tabelka podsumowuje najwa\u017cniejsze w\u0142a\u015bciwo\u015bci r\u00f3\u017cnych z\u0142\u00f3\u017c stosowanych w chromatografii wykluczenia mas.<\/p>\n\n\n\n<figure class=\"wp-block-table\"><table class=\"has-fixed-layout\"><tbody><tr><td><strong>Typ z\u0142o\u017ca<\/strong><\/td><td><strong>G\u0142\u00f3wna &#8222;chemia&#8221; powierzchni<\/strong><\/td><td><strong>\u015arodowisko pracy<\/strong><\/td><td><strong>G\u0142\u00f3wny obszar zastosowa\u0144<\/strong><\/td><\/tr><tr><td><strong>Modyfikowana Krzemionka<\/strong><\/td><td>Grupy <strong>Diol<\/strong><\/td><td>Wodne \/ S\u00f3l<\/td><td>Bia\u0142ka, peptydy (wysoka rozdzielczo\u015b\u0107)<\/td><\/tr><tr><td><strong>Hybryda (np. BEH)<\/strong><\/td><td>Grupy <strong>Diol<\/strong><\/td><td>Wodne<\/td><td><strong>UPLC<\/strong>, szybka analityka mAbs<\/td><\/tr><tr><td><strong>PS\/DVB (Polimer)<\/strong><\/td><td>Pier\u015bcienie aromatyczne<\/td><td>Organiczne (THF, DMF)<\/td><td>Polimery syntetyczne, tworzywa sztuczne<\/td><\/tr><tr><td><strong>Polimetakrylany<\/strong><\/td><td>Grupy <strong>Hydroksylowe<\/strong><\/td><td>Wodne (szerokie pH)<\/td><td>Polisacharydy, polimery rozpuszczalne w wodzie<\/td><\/tr><tr><td><strong>Agaroza\/Dekstran<\/strong><\/td><td>Grupy cukrowe<\/td><td>Wodne (bufor)<\/td><td>Preparatyka bia\u0142ek, odsolanie, bioproces<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\">Faza ruchoma: Sztuka unikania oddzia\u0142ywa\u0144<\/h2>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">Idealna separacja SEC zachodzi wtedy, gdy <strong>nie wyst\u0119puj\u0105 \u017cadne oddzia\u0142ywania chemiczne<\/strong> mi\u0119dzy analitem a faz\u0105 stacjonarn\u0105. Faza ruchoma musi zatem pe\u0142ni\u0107 rol\u0119 &#8222;bufora&#8221; eliminuj\u0105cego efekty uboczne.<\/p>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\"><strong>Kluczowe parametry:<\/strong><\/p>\n\n\n\n<ul class=\"wp-block-list\">\n<li><strong>Si\u0142a jonowa:<\/strong> W GFC (analiza bia\u0142ek) zbyt niska si\u0142a jonowa mo\u017ce prowadzi\u0107 do niepo\u017c\u0105danych oddzia\u0142ywa\u0144 elektrostatycznych z resztkowymi grupami silanolowymi na powierzchni krzemionki. Zazwyczaj stosuje si\u0119 st\u0119\u017cenia soli rz\u0119du 150-300 mM.<\/li>\n\n\n\n<li><strong>pH:<\/strong> Musi zapewnia\u0107 stabilno\u015b\u0107 analitu i minimalizowa\u0107 \u0142adunek powierzchniowy z\u0142o\u017ca. W przypadku rozdzia\u0142u bia\u0142ek dobrze, by pH fazy ruchomej by\u0142o zbli\u017cone do punktu izoelektrycznego analit\u00f3w. Zminimalizuje to \u0142adunek bia\u0142ka i zmniejszy mo\u017cliwe interakcje jonowe z faz\u0105 stacjonarn\u0105.<\/li>\n\n\n\n<li><strong>Dodatki organiczne:<\/strong> Niekiedy dodaje si\u0119 niewielkie ilo\u015bci izopropanolu lub acetonitrylu, aby zapobiec oddzia\u0142ywaniom hydrofobowym bia\u0142ek ze szkieletem polimerowym z\u0142o\u017ca.<\/li>\n<\/ul>\n\n\n<div class=\"wp-block-image\">\n<figure class=\"aligncenter size-full is-resized\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" width=\"856\" height=\"384\" src=\"https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/02\/opt_fazy_ruchomej_SEC.png\" alt=\"Optymalizacja fazy ruchomej w chromatografii wykluczenia mas (SEC)\" class=\"wp-image-1983\" style=\"aspect-ratio:2.22922541051584;width:609px;height:auto\" srcset=\"https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/02\/opt_fazy_ruchomej_SEC.png 856w, https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/02\/opt_fazy_ruchomej_SEC-300x135.png 300w, https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/02\/opt_fazy_ruchomej_SEC-768x345.png 768w\" sizes=\"auto, (max-width: 856px) 100vw, 856px\" \/><\/figure>\n<\/div>\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\"><strong>Zastosowania chromatografii wykluczenia mas<\/strong><\/h2>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\"><strong>Badanie agregacji bia\u0142ek<\/strong><\/p>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">W biofarmacji SEC jest z\u0142otym standardem w monitorowaniu czysto\u015bci przeciwcia\u0142 monoklonalnych (mAbs). Pozwala na precyzyjne oddzielenie monomer\u00f3w od dimer\u00f3w i wy\u017cszych agregat\u00f3w, co jest kluczowe dla bezpiecze\u0144stwa immunologicznego leku.<\/p>\n\n\n\n<figure class=\"wp-block-image size-large\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" width=\"1024\" height=\"447\" src=\"https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/02\/SEC_chromatogram_mabs-1024x447.png\" alt=\"Przyk\u0142adowy chromatogram SEC rozdzia\u0142u przeciwcia\u0142 monoklonalnych\" class=\"wp-image-1984\" srcset=\"https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/02\/SEC_chromatogram_mabs-1024x447.png 1024w, https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/02\/SEC_chromatogram_mabs-300x131.png 300w, https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/02\/SEC_chromatogram_mabs-768x335.png 768w, https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/02\/SEC_chromatogram_mabs.png 1050w\" sizes=\"auto, (max-width: 1024px) 100vw, 1024px\" \/><figcaption class=\"wp-element-caption\">Chromatografia wykluczenia mas (SEC) przeciwcia\u0142 monoklonalnych. Na chromatogramie widoczne s\u0105 piki agregat\u00f3w (ok. 300 kDa), monomeru (ok. 150 kDa) i fragment\u00f3w przeciwcia\u0142a (ok. 75 kDa).<\/figcaption><\/figure>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\"><strong>Wyznaczanie mas cz\u0105steczkowych i polidyspersji<\/strong><\/p>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">W analizie polimer\u00f3w, SEC (GPC) dostarcza informacji o rozk\u0142adzie mas cz\u0105steczkowych.<\/p>\n\n\n\n<ul class=\"wp-block-list\">\n<li><strong>M<sub>n<\/sub> (liczbowo \u015brednia masa cz\u0105steczkowa)<\/strong><\/li>\n\n\n\n<li><strong>M<sub>w<\/sub> (wagowo \u015brednia masa cz\u0105steczkowa)<\/strong><\/li>\n\n\n\n<li><strong>PDI (Indeks polidyspersji):<\/strong> Stosunek Mw\/Mn, okre\u015blaj\u0105cy jednorodno\u015b\u0107 pr\u00f3bki.<\/li>\n<\/ul>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\"><strong>6. Praktyczne wskaz\u00f3wki dla analityka<\/strong><\/p>\n\n\n\n<ol start=\"1\" class=\"wp-block-list\">\n<li><strong>Przygotowanie pr\u00f3bki:<\/strong> Pr\u00f3bka musi by\u0107 w pe\u0142ni rozpuszczalna w fazie ruchomej. Filtracja (0.22 um) jest obowi\u0105zkowa, aby chroni\u0107 kosztown\u0105 kolumn\u0119.<\/li>\n\n\n\n<li><strong>Dob\u00f3r por\u00f3w:<\/strong> Rozmiar por\u00f3w musi by\u0107 dopasowany do oczekiwanej masy analitu. Je\u015bli pr\u00f3bka eluuje w V0, pory s\u0105 za ma\u0142e; je\u015bli w Vt, pory s\u0105 za du\u017ce.<\/li>\n\n\n\n<li><strong>Kalibracja:<\/strong> SEC jest technik\u0105 wzgl\u0119dn\u0105. Wymaga kalibracji za pomoc\u0105 wzorc\u00f3w o znanej masie i strukturze zbli\u017conej do analitu. Na rynku s\u0105 dost\u0119pne mieszaniny kalibracyjne dostosowane sk\u0142adem do r\u00f3\u017cnego rodzaju analiz.<\/li>\n<\/ol>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\"><strong>Literatura<\/strong><\/p>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\"><\/p>\n\n\n\n<ol start=\"1\" class=\"wp-block-list\">\n<li><a href=\"https:\/\/pubmed.ncbi.nlm.nih.gov\/27914608\/\">Goyon A., et al., <em>Evaluation of size exclusion chromatography columns packed with sub-3\u03bcm particles for the analysis of biopharmaceutical proteins<\/em>, J. Chromatogr. A, 1498 (2017), 80-89.<\/a><\/li>\n\n\n\n<li><a href=\"https:\/\/pubmed.ncbi.nlm.nih.gov\/23378719\/\">Hong P., Koza S., Bouvier E.S.P., <em>Size-Exclusion Chromatography for the Analysis of Biotherapeutics and their Aggregates<\/em>, J. Liq. Chromatogr. Relat. Technol., 35 (2012), 2923-2950.<\/a><\/li>\n<\/ol>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\"><\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>W \u015bwiecie nowoczesnej chemii analitycznej, gdzie dominuj\u0105 oddzia\u0142ywania powinowactwa, wymiana jonowa czy odwr\u00f3cone fazy, chromatografia wykluczenia mas (ang. Size Exclusion Chromatography \u2013 SEC) zajmuje miejsce&hellip;<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":1990,"parent":107,"menu_order":0,"comment_status":"closed","ping_status":"closed","template":"","meta":{"_sitemap_exclude":false,"_sitemap_priority":"","_sitemap_frequency":"","footnotes":""},"class_list":["post-1980","page","type-page","status-publish","has-post-thumbnail","hentry"],"yoast_head":"<!-- This site is optimized with the Yoast SEO plugin v27.6 - https:\/\/yoast.com\/product\/yoast-seo-wordpress\/ -->\n<title>Chromatografia wykluczenia mas - Bioeducator.eu<\/title>\n<meta name=\"description\" content=\"Co to jest chromatografia wykluczenia mas (SEC)? Mechanizm rozdzia\u0142u, dob\u00f3r kolumny, fazy ruchomej i parametr\u00f3w rozdzia\u0142u. Zastosowanie.\" \/>\n<meta name=\"robots\" content=\"index, follow, max-snippet:-1, max-image-preview:large, max-video-preview:-1\" \/>\n<link rel=\"canonical\" href=\"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=1980\" \/>\n<meta property=\"og:locale\" content=\"pl_PL\" \/>\n<meta property=\"og:type\" content=\"article\" \/>\n<meta property=\"og:title\" content=\"Chromatografia wykluczenia mas - Bioeducator.eu\" \/>\n<meta property=\"og:description\" content=\"Co to jest chromatografia wykluczenia mas (SEC)? Mechanizm rozdzia\u0142u, dob\u00f3r kolumny, fazy ruchomej i parametr\u00f3w rozdzia\u0142u. Zastosowanie.\" \/>\n<meta property=\"og:url\" content=\"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=1980\" \/>\n<meta property=\"og:site_name\" content=\"Bioeducator.eu\" \/>\n<meta property=\"og:image\" content=\"https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/02\/chromatogtafia-SEC_okladka-1024x683.png\" \/>\n\t<meta property=\"og:image:width\" content=\"1024\" \/>\n\t<meta property=\"og:image:height\" content=\"683\" \/>\n\t<meta property=\"og:image:type\" content=\"image\/png\" \/>\n<meta name=\"twitter:card\" content=\"summary_large_image\" \/>\n<meta name=\"twitter:label1\" content=\"Szacowany czas czytania\" \/>\n\t<meta name=\"twitter:data1\" content=\"9 minut\" \/>\n<script type=\"application\/ld+json\" class=\"yoast-schema-graph\">{\"@context\":\"https:\\\/\\\/schema.org\",\"@graph\":[{\"@type\":\"WebPage\",\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=1980\",\"url\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=1980\",\"name\":\"Chromatografia wykluczenia mas - Bioeducator.eu\",\"isPartOf\":{\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/#website\"},\"primaryImageOfPage\":{\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=1980#primaryimage\"},\"image\":{\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=1980#primaryimage\"},\"thumbnailUrl\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/wp-content\\\/uploads\\\/2026\\\/02\\\/chromatogtafia-SEC_okladka.png\",\"datePublished\":\"2026-02-09T08:00:00+00:00\",\"description\":\"Co to jest chromatografia wykluczenia mas (SEC)? Mechanizm rozdzia\u0142u, dob\u00f3r kolumny, fazy ruchomej i parametr\u00f3w rozdzia\u0142u. Zastosowanie.\",\"breadcrumb\":{\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=1980#breadcrumb\"},\"inLanguage\":\"pl-PL\",\"potentialAction\":[{\"@type\":\"ReadAction\",\"target\":[\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=1980\"]}]},{\"@type\":\"ImageObject\",\"inLanguage\":\"pl-PL\",\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=1980#primaryimage\",\"url\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/wp-content\\\/uploads\\\/2026\\\/02\\\/chromatogtafia-SEC_okladka.png\",\"contentUrl\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/wp-content\\\/uploads\\\/2026\\\/02\\\/chromatogtafia-SEC_okladka.png\",\"width\":1536,\"height\":1024,\"caption\":\"Chromatografia wykluczenia mas - ok\u0142adka\"},{\"@type\":\"BreadcrumbList\",\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=1980#breadcrumb\",\"itemListElement\":[{\"@type\":\"ListItem\",\"position\":1,\"name\":\"Strona g\u0142\u00f3wna\",\"item\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/\"},{\"@type\":\"ListItem\",\"position\":2,\"name\":\"Bioeducator\",\"item\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/\"},{\"@type\":\"ListItem\",\"position\":3,\"name\":\"Baza wiedzy\",\"item\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?page_id=107\"},{\"@type\":\"ListItem\",\"position\":4,\"name\":\"Chromatografia wykluczenia mas\"}]},{\"@type\":\"WebSite\",\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/#website\",\"url\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/\",\"name\":\"Bioeducator.eu\",\"description\":\"\",\"publisher\":{\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/#organization\"},\"potentialAction\":[{\"@type\":\"SearchAction\",\"target\":{\"@type\":\"EntryPoint\",\"urlTemplate\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/?s={search_term_string}\"},\"query-input\":{\"@type\":\"PropertyValueSpecification\",\"valueRequired\":true,\"valueName\":\"search_term_string\"}}],\"inLanguage\":\"pl-PL\"},{\"@type\":\"Organization\",\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/#organization\",\"name\":\"Bioeducator.eu\",\"url\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/\",\"logo\":{\"@type\":\"ImageObject\",\"inLanguage\":\"pl-PL\",\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/#\\\/schema\\\/logo\\\/image\\\/\",\"url\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/wp-content\\\/uploads\\\/2025\\\/03\\\/Bioeducator_logo_poziom.png\",\"contentUrl\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/wp-content\\\/uploads\\\/2025\\\/03\\\/Bioeducator_logo_poziom.png\",\"width\":3910,\"height\":935,\"caption\":\"Bioeducator.eu\"},\"image\":{\"@id\":\"https:\\\/\\\/bioeducator.eu\\\/#\\\/schema\\\/logo\\\/image\\\/\"}}]}<\/script>\n<!-- \/ Yoast SEO plugin. -->","yoast_head_json":{"title":"Chromatografia wykluczenia mas - Bioeducator.eu","description":"Co to jest chromatografia wykluczenia mas (SEC)? Mechanizm rozdzia\u0142u, dob\u00f3r kolumny, fazy ruchomej i parametr\u00f3w rozdzia\u0142u. Zastosowanie.","robots":{"index":"index","follow":"follow","max-snippet":"max-snippet:-1","max-image-preview":"max-image-preview:large","max-video-preview":"max-video-preview:-1"},"canonical":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=1980","og_locale":"pl_PL","og_type":"article","og_title":"Chromatografia wykluczenia mas - Bioeducator.eu","og_description":"Co to jest chromatografia wykluczenia mas (SEC)? Mechanizm rozdzia\u0142u, dob\u00f3r kolumny, fazy ruchomej i parametr\u00f3w rozdzia\u0142u. Zastosowanie.","og_url":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=1980","og_site_name":"Bioeducator.eu","og_image":[{"width":1024,"height":683,"url":"https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/02\/chromatogtafia-SEC_okladka-1024x683.png","type":"image\/png"}],"twitter_card":"summary_large_image","twitter_misc":{"Szacowany czas czytania":"9 minut"},"schema":{"@context":"https:\/\/schema.org","@graph":[{"@type":"WebPage","@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=1980","url":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=1980","name":"Chromatografia wykluczenia mas - Bioeducator.eu","isPartOf":{"@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/#website"},"primaryImageOfPage":{"@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=1980#primaryimage"},"image":{"@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=1980#primaryimage"},"thumbnailUrl":"https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/02\/chromatogtafia-SEC_okladka.png","datePublished":"2026-02-09T08:00:00+00:00","description":"Co to jest chromatografia wykluczenia mas (SEC)? Mechanizm rozdzia\u0142u, dob\u00f3r kolumny, fazy ruchomej i parametr\u00f3w rozdzia\u0142u. Zastosowanie.","breadcrumb":{"@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=1980#breadcrumb"},"inLanguage":"pl-PL","potentialAction":[{"@type":"ReadAction","target":["https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=1980"]}]},{"@type":"ImageObject","inLanguage":"pl-PL","@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=1980#primaryimage","url":"https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/02\/chromatogtafia-SEC_okladka.png","contentUrl":"https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2026\/02\/chromatogtafia-SEC_okladka.png","width":1536,"height":1024,"caption":"Chromatografia wykluczenia mas - ok\u0142adka"},{"@type":"BreadcrumbList","@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=1980#breadcrumb","itemListElement":[{"@type":"ListItem","position":1,"name":"Strona g\u0142\u00f3wna","item":"https:\/\/bioeducator.eu\/"},{"@type":"ListItem","position":2,"name":"Bioeducator","item":"https:\/\/bioeducator.eu\/"},{"@type":"ListItem","position":3,"name":"Baza wiedzy","item":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=107"},{"@type":"ListItem","position":4,"name":"Chromatografia wykluczenia mas"}]},{"@type":"WebSite","@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/#website","url":"https:\/\/bioeducator.eu\/","name":"Bioeducator.eu","description":"","publisher":{"@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/#organization"},"potentialAction":[{"@type":"SearchAction","target":{"@type":"EntryPoint","urlTemplate":"https:\/\/bioeducator.eu\/?s={search_term_string}"},"query-input":{"@type":"PropertyValueSpecification","valueRequired":true,"valueName":"search_term_string"}}],"inLanguage":"pl-PL"},{"@type":"Organization","@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/#organization","name":"Bioeducator.eu","url":"https:\/\/bioeducator.eu\/","logo":{"@type":"ImageObject","inLanguage":"pl-PL","@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/#\/schema\/logo\/image\/","url":"https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2025\/03\/Bioeducator_logo_poziom.png","contentUrl":"https:\/\/bioeducator.eu\/wp-content\/uploads\/2025\/03\/Bioeducator_logo_poziom.png","width":3910,"height":935,"caption":"Bioeducator.eu"},"image":{"@id":"https:\/\/bioeducator.eu\/#\/schema\/logo\/image\/"}}]}},"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/bioeducator.eu\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/pages\/1980","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/bioeducator.eu\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/pages"}],"about":[{"href":"https:\/\/bioeducator.eu\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/types\/page"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/bioeducator.eu\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/bioeducator.eu\/index.php?rest_route=%2Fwp%2Fv2%2Fcomments&post=1980"}],"version-history":[{"count":4,"href":"https:\/\/bioeducator.eu\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/pages\/1980\/revisions"}],"predecessor-version":[{"id":1992,"href":"https:\/\/bioeducator.eu\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/pages\/1980\/revisions\/1992"}],"up":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/bioeducator.eu\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/pages\/107"}],"wp:featuredmedia":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/bioeducator.eu\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/media\/1990"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/bioeducator.eu\/index.php?rest_route=%2Fwp%2Fv2%2Fmedia&parent=1980"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}