{"id":1619,"date":"2025-07-30T08:10:09","date_gmt":"2025-07-30T06:10:09","guid":{"rendered":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=1619"},"modified":"2026-01-20T09:20:53","modified_gmt":"2026-01-20T08:20:53","slug":"jak-liczyc-komorki-w-komorze-burkera","status":"publish","type":"page","link":"https:\/\/bioeducator.eu\/?page_id=1619","title":{"rendered":"Jak liczy\u0107 kom\u00f3rki w komorze B\u00fcrkera?"},"content":{"rendered":"\n

Je\u015bli czytasz ten artyku\u0142, stoisz przed wyzwaniem policzenia kom\u00f3rek w zawiesinie. O r\u00f3\u017cnych sposobach liczenia <\/a>kom\u00f3rek pisali\u015bmy ju\u017c wcze\u015bniej. W tym artykule odpowiemy na pytanie: Jak liczy\u0107 kom\u00f3rki w komorze B\u00fcrkera?<\/p>\n\n\n\n

Czym jest komora B\u00fcrkera?<\/h2>\n\n\n\n

Komora Burkera jest rodzajem hemacytometru, czyli specjalnego szkie\u0142ka mikroskopowego do liczenia kom\u00f3rek krwi. Dzi\u0119ki specjalnej budow\u0119 umo\u017cliwia szybkie i dok\u0142adne policzenie kom\u00f3rek w pr\u00f3bce. Wprawionym specjalistom zajmuje to tylko kilka minut. Liczenie odbywa si\u0119 w trakcie obserwacji mikroskopowej.<\/p>\n\n\n\n

Jak zbudowana jest komora B\u00fcrkera?<\/h2>\n\n\n\n
\n
\n
\"Komora
Przekr\u00f3j przez komor\u0119 Burkera<\/figcaption><\/figure>\n<\/div><\/div>\n\n\n\n
\n

Komora B\u00fcrkera ma posta\u0107 szkie\u0142ka mikroskopowego.  Szkie\u0142ko ma specjaln\u0105 posta\u0107. Mo\u017cemy na nim zauwa\u017cy\u0107 cztery g\u0142adkie powierzchnie, dwie centralne (g\u00f3rna i dolna) oraz dwie boczne. Centralne powierzchnie s\u0105 u\u0142o\u017cone nieco ni\u017cej ni\u017c powierzchnie boczne (0,1 mm). Na tych powierzchniach narysowane s\u0105 siatki, s\u0142u\u017c\u0105ce do liczenia kom\u00f3rek. Na powierzchniach bocznych opiera si\u0119 szkie\u0142ko nakrywkowe.<\/p>\n<\/div>\n<\/div>\n\n\n\n

\n
\n

Siatka narysowana na centralnych powierzchniach sk\u0142ada si\u0119 z 9 du\u017cych kwadrat\u00f3w (otoczonych trzema liniami). Ka\u017cdy z tych kwadrat\u00f3w ma 1 mm2 powierzchni i podzielony jest na 25 mniejszych o wymiarach 0,2 x 0,2 mm oraz 25 kwadrat\u00f3w o wymiarach 0,05 x 0,05 mm. Kwadraty te s\u0142u\u017c\u0105 do liczenia kom\u00f3rek o r\u00f3\u017cnych rozmiarach. Przyk\u0142adowo limfocyty liczymy w najwi\u0119kszych kwadratach, erytrocyty, kt\u00f3rych jest du\u017co wi\u0119cej w \u015brednich a p\u0142ytki krwi w najmniejszych.<\/p>\n<\/div>\n\n\n\n

\n
\"Burker
Wymiary siatki w komorze Burkera<\/figcaption><\/figure>\n<\/div><\/div>\n<\/div>\n\n\n\n

Siatka wraz ze szkie\u0142kiem nakrywkowym tworzy przestrze\u0144 o znanych wymiarach. Dzi\u0119ki temu mo\u017cliwe jest dok\u0142adne okre\u015blenie zag\u0119szczenia kom\u00f3rek.<\/p>\n\n\n\n

Przygotowanie zawiesiny kom\u00f3rek<\/h2>\n\n\n\n

Przed przyst\u0105pieniem do liczenia, kom\u00f3rki nale\u017cy odpowiednio przygotowa\u0107. Najcz\u0119\u015bciej znajduj\u0105 si\u0119 ma\u0142ej obj\u0119to\u015bci po\u017cywki. W takim wypadku kom\u00f3rki dobrze jest rozcie\u0144czy\u0107 przed na\u0142o\u017ceniem na szkie\u0142ko. Pami\u0119taj by za ka\u017cdym razem przed pobraniem pr\u00f3bki kom\u00f3rek porusza\u0107 naczyniem w g\u00f3r\u0119 i w d\u00f3\u0142 by dobrze je zawiesi\u0107. W przeciwnym wypadku w wyniku sedymentacji opadn\u0105 na dno naczynia i wynik pomiaru b\u0119dzie niewiarygodny. Do wykonania pomiaru wystarczy oko\u0142o 10 \u03bcl zawiesiny.<\/p>\n\n\n\n

Przygotowanie komory do liczenia<\/h2>\n\n\n\n

Aby przygotowa\u0107 komor\u0119 nale\u017cy na\u0142o\u017cy\u0107 na ni\u0105 szkie\u0142ko nakrywkowe, tak by by\u0142o nieruchome. Niekt\u00f3re komory wyposa\u017cone s\u0105 w specjalne dociski, kt\u00f3re unieruchamiaj\u0105 szkie\u0142ko. Gdy jednak ich nie ma nale\u017cy lekko zwil\u017cy\u0107 dwie boczne g\u0142adkie powierzchnie. Szkie\u0142ko nakrywko mo\u017cna lekko docisn\u0105\u0107 palcami i unieruchomi\u0107. Komora gotowa.<\/p>\n\n\n\n

Barwienie Trypanem<\/h2>\n\n\n\n

Zazwyczaj, gdy liczymy kom\u00f3rki zale\u017cy nam tylko na tych \u017cywych. Warto wi\u0119c w jaki\u015b spos\u00f3b odr\u00f3\u017cni\u0107 kom\u00f3rki martwe od \u017cywych i wyznaczy\u0107 \u017cywotno\u015b\u0107 kom\u00f3rek. Uzyskamy dzi\u0119ki temu cenn\u0105 wiedze na temat stanu hodowli, kt\u00f3r\u0105 prowadzimy.<\/p>\n\n\n\n

By odr\u00f3\u017cni\u0107 mikroskopowo kom\u00f3rki martwe od \u017cywych u\u017cywa si\u0119 b\u0142\u0119kitu trypanu. Wnika on do martwych kom\u00f3rek i wybarwia je na niebiesko. W celu wybarwienia pr\u00f3by do 10 \u03bcl zawiesiny kom\u00f3rek nale\u017cy doda\u0107 10 \u03bcl b\u0142\u0119kitu trypanu i dobrze wymiesza\u0107.<\/p>\n\n\n\n

UWAGA! Od tej chwili nale\u017cy dzia\u0142a\u0107 szybko. B\u0142\u0119kit trypanu jest toksyczny i po oko\u0142o 5 minutach zaczyna zabija\u0107 kom\u00f3rki a wi\u0119c zaburza\u0107 wynik<\/strong><\/p>\n\n\n\n

Liczenie<\/h2>\n\n\n\n

Po dodaniu b\u0142\u0119kitu trypanu, mo\u017cemy na\u0142o\u017cy\u0107 pr\u00f3bk\u0119 do komory B\u00fcrkera. Komor\u0119 najlepiej przygotowa\u0107 wcze\u015bniej. Za pomoc\u0105 pipety automatycznej (najlepiej 1- 10 \u03bcl lub 2 \u2013 20 \u03bcl) nak\u0142adamy wybarwion\u0105 zawiesin\u0119 kom\u00f3rek do komory. Robimy to poprzez napipetowanie 10 \u03bcl pomi\u0119dzy szkie\u0142ko nakrywkowe a powierzchni\u0119 centraln\u0105. Obj\u0119to\u015b\u0107 10 \u03bcl b\u0119dzie wystarczaj\u0105ca by usun\u0105\u0107 p\u0119cherzyki powietrza.<\/p>\n\n\n\n

Podczas liczenia wa\u017cne jest by ka\u017cd\u0105 kom\u00f3rk\u0119 policzy\u0107 tylko jeden raz. Dla pocz\u0105tkuj\u0105cych mo\u017ce to stwarza\u0107 pewien problem, w szczeg\u00f3lno\u015bci gdy kom\u00f3rki le\u017c\u0105 na linia granicznych pomi\u0119dzy polami. Jest na to jednak pewien spos\u00f3b. Dla ka\u017cdego pola wybieramy dwie linie (np. lew\u0105 i g\u00f3rn\u0105). Kom\u00f3rki le\u017c\u0105ce na tych liniach zaliczamy do tego kwadratu. Je\u015bli, kt\u00f3ra\u015b kom\u00f3rka le\u017cy na innej linii, zaliczana jest do kwadratu s\u0105siaduj\u0105cego. Dzi\u0119ki temu mamy pewno\u015b\u0107, \u017ce nie policzymy kom\u00f3rek dwa razy. Warto si\u0119 r\u00f3wnie\u017c wspomaga\u0107 klikerami, dzi\u0119ki czemu nie musimy si\u0119 skupia\u0107 na liczeniu a jedynie klikamy kolejne kom\u00f3rki.<\/p>\n\n\n\n

Obliczenia<\/h2>\n\n\n\n

Po wykonaniu pomiaru przychodzi czas na obliczenia. W celu oznaczenia zag\u0119szczenia kom\u00f3rek nale\u017cy podzieli\u0107 wynik pomiaru przez obj\u0119to\u015b\u0107 komory. Ta za\u015b wyznaczona jest wymiarami siatki i wysoko\u015bci\u0105 szkie\u0142ka nakrywkowego. W przypadku du\u017cych kom\u00f3rek, kt\u00f3re liczymy w najwi\u0119kszych kwadratach komora ma wymiar 1 x 1 x 0,1 mm a wi\u0119c 0,001 cm3.<\/p>\n\n\n

\n
\"\"<\/figure>\n<\/div>\n\n\n

W obliczeniach powinni\u015bmy r\u00f3wnie\u017c uwzgl\u0119dni\u0107 rozcie\u0144czenie kom\u00f3rek jakie wykonali\u015bmy przygotowuj\u0105c kom\u00f3rki oraz rozcie\u0144czenie kom\u00f3rek, w wyniku barwienia b\u0142\u0119kitem trypanu. Ostateczny wz\u00f3r po uproszczeniu dzielenia wygl\u0105da wi\u0119c nast\u0119puj\u0105co<\/p>\n\n\n

\n
\"\"<\/figure>\n<\/div>\n\n\n

<\/p>\n\n\n\n

\n
\n

UWAGA! W celu zmniejszenia b\u0142\u0119du zalecam liczenie w minimum trzech kwadratach i u\u015brednienie wyniku pomiaru. Kwadraty dobrze jest wybiera\u0107 po skosie by pokry\u0107 zar\u00f3wno przedni\u0105, \u015brodkow\u0105 jak i tyln\u0105 cz\u0119\u015b\u0107 siatki.<\/strong><\/p>\n<\/div>\n\n\n\n

\n
\"Komora
Wyb\u00f3r kwadrat\u00f3w w komorze Burkera<\/figcaption><\/figure>\n<\/div><\/div>\n<\/div>\n\n\n
\n
\"\"<\/figure>\n<\/div>\n\n\n